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分享一下从组织RNA提取的方法及原理
  今天跟大家分享一下从组织RNA提取方法及原理吧
 
  细胞内的大部分RNA是以核蛋白复合体的形式存在。trizol含有异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体解离,即分离RNA和与之结合的蛋白质,并将RNA释放到溶液中。
 
  当加入氯的时候,它可抽提酸性苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可以形成水相层和有机层。其中水相层在上,有机层在下,中间层是DNA和蛋白质。
 
  就是说会有三层,而RNA在水相层内,即上层中。异丙醇的作用是沉淀RNA。乙醇的作用是洗掉异丙醇。
 
  从组织中提取总RNA
 
  1)液氮研磨(磨的时候小心组织样品飞掉,如果飞掉,我们一般是用镊子夹回来的),组织块直接放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨,待组织变软(不要等组织变软(实际证明软一次没关系。
 
  乘它软的时候,把它压薄,然后加液氮后变硬很容易研磨,其实加液氮不仅防止RNA降解而且更利于研磨),变软后RNA容易降解,若液氮挥发完要迅速补充液氮,一直让样品保持冻着的状态。
 
  研磨这步很重要,研磨既要充分又不能让RNA降解),再加少量液氮,再研磨,如此三次(肯定超过三次的),按50-100mg 组织/ml Trizol 加入Trizol(一般1000ml,加Trizol前聚组织于一堆,这样方便吸),转入离心管进行第2 步操作。
 
  2) 匀浆(组织用研钵研磨时要研磨充分,之后就不需要再匀浆了。):组织样品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol。
 
  另外,组织体积不能超过Trizol 体积的10%,否则匀浆效果会不好,用电动匀浆器充分匀浆约需1-2 分钟。
 
  二、从细胞中提取总RNA
 
  1) 培养贴壁细胞:不须消化,可直接用Trizol进行消化、裂解,Trizol体积按10cm2/ml比例加入。
 
  2) 悬浮细胞可直接收集、裂解,每1ml Trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞,或107细菌细胞
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