欢迎光临上海钦诚生物科技有限公司
主页 > 技术文章 > 样本核酸提取的春花原则和要求有哪些?
技术文章
样本核酸提取的春花原则和要求有哪些?
  核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),其中RNA又可以根据功能的不同分为核糖体RNA(rRNA),信使RNA(mRNA)和转移RNA(tRNA)。
 
  DNA主要集中在细胞核内,线粒体和叶绿体中,而RNA主要分布在细胞质当中。
 
  核酸中因为嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键,所以核酸具有紫外吸收的特性,DNA钠盐的紫外吸收在260nm附近,其吸光率以A260表示,在230nm处于吸收低谷,因此可以使用紫外分光光度计对核酸进行定量及定性测定。
 
  核酸为两性电解质,相当于多元酸,可以使用中性或偏碱性的缓冲液使核酸解离成阴离子,置于电场中向阳极运动,这就是电泳的原理。
 
  样本核酸提取纯化原则和要求
 
  1、保证核酸一级结构的完整性
 
  2、排除其它分子的污染(如提取DNA时排除RNA的干扰)
 
  3、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和高浓度的金属离子
 
  4、尽可能降低蛋白质、多糖和脂类等大分子物质
 
  核酸提取类型
 
  1、总RNA提取
 
  总RNA中,75-85%为rRNA(主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA),其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、5S rRNA、5.8S rRNA、miRNA、siRNA、小核RNA(small nuclear RNA,snRNA)及核仁小分子RNA(small nuceolar RNA,snoRNA)等组成。
 
  2、miRNA提取
 
  MicroRNAs (miRNAs)是小型的、高度保守的RNA分子,如小干扰RNAs (siRNAs),通过与他们的碱基配对调节其同源mRNA的分子表达,以预防通过各种机制的表达。他们已成为进行发育、细胞增殖、分化和细胞周期的重点监管机构。
 
  3、基因组DNA提取
 
  进行基因结构和功能研究以及基因诊断,通常要求得到的片段长度不小于100~200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。
 
  4、质粒抽提
 
  质粒抽提方法即去除RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。
  • ©2021上海钦诚生物科技有限公司版权所有 技术支持:化工仪器网
  • QQ号码:597467067 邮 箱:shqcsw01@163.com 地 址:上海市宝山区长江西路2351号2楼8室-8 备案号:沪ICP备19009120号-2 总访问量:30077
在线客服 联系方式

服务热线

18121034793