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组织RNA提取的操作注意事项你知道有哪些么
  组织RNA提取的操作注意事项你知道有哪些么?今天就让我们一起来了解一下吧。
 
  由于rna酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功,请仔细阅读下列注意事项,相信它能帮助您解决常见的问题。
 
  归根究底,RNA工作的主要问题是防止RNA酶的污染。RNA酶无处不在,在实验操作的任何一步,任何偶然的疏忽或不当操作都有可能造成RNA酶污染,从而导致整个实验失败。因此,严格控制实验条件,避免任何可能的污染是保证实验成功的关键,必须做到以下几点:
 
  1.如果可能,实验室应辟出专门RNA操作区,离心机、移液枪、试剂等均应专用。RNA操作区应保持清洁,并定期进行消毒。
 
  2.操作过程中应自始至终佩戴抛弃式橡胶或乳胶手套,并经常更换,以避免将手、臂上的细菌和真菌以及人体自身分泌的RNA酶带入试管或污染用具。尽量避免使用抛弃式塑料手套。塑料手套不贴身,常常造成操作不便,而且多出部分还容易在器具上遭RNA酶污染并向未污染处传递,扩大污染。
 
  3.尽量使用一次性枪头、离心管等塑料制品,尽量避免与其它实验共享器具,以防止交叉污染。推荐使用出厂前已经灭菌的枪头和离心管,大多国外厂商供应的无菌塑料制品很少有RNA酶污染,买来后可直接用于RNA操作。许多研究者用DEPC等处理的塑料制品,往往由于二次污染而带有RNA酶,从而导致实验失败。
 
  4.配制溶液用的酒精,异丙醇、Tris等应采用未开封的新品。溶液需用DEPC水配制(加0.01%(体积比)DEPC至重蒸水或Mili Q级水中,处理过夜,灭菌即成DEPC水)。
 
  5.所有玻璃制品都必须在240℃烘烤4小时。所有旧塑料制品都必须用0.5M的NaOH处理10分钟,并用DEPC-H2O彻底冲洗后灭菌,也可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。无法用DEPC处理的用具可以用氯仿擦拭若干次,这样通常可以消除RNA酶的活性。
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