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荧光定量PCR检测原理你知道是什么么
  荧光定量通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。
 
  荧光定量PCR检测技术诞生至今已10多年的时间,而其应用一直都没广泛展开,究其原因,无外乎受制于相关仪器、试剂和技术的发展。近期,尤其是08年以来,仪器和试剂是遍地开花,这也使科研人员均跃跃欲试,都想借此技术使自己的研究能突飞猛进,发展势头通过查找每年所发表的文章数可一目了然。
 
  据有关统计,在Medline数据库中,用“Taqman”或”realtimePCR”作为关键词检索,1996年是19篇,1999年157篇,到2003年就高达2984篇,2009年会是多少呢?我们不得而知。
 
  但其迅猛的发展势头却是不可更改的,本公司真诚希望能和众多研究人员共同努力,抓住这一大好时机,为科研事业的发展贡献自身的力量。基于这一目标,本公司长期以来对荧光定量PCR,无论是技术还是多年来的产品,均进行了深入地研究,并及时推出更加优异的荧光定量PCR技术服务。
 
  荧光定量PCR原理
 
  荧光定量PCR最早称TaqManPCR,后来也叫Real-TimePCR,是美国PE(PerkinElmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。
 
  该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
 
  一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。
 
  而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据最终的PCR产物量也不能计算出起始DNA拷贝数。
 
  只有在荧光信号指数扩增阶段,PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量PCR技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和CT值(如下图所示)。
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