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样本核酸提取

样本核酸提取

简要描述:

柱式病毒RNA提取试剂盒$n英文名称:Column Viral RNAOUT$n运输:常温$n保存:常温$n有效期:1年$n货期:现货$n其他:

产品时间:2020-03-25

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样本核酸提取

 

英文名称:Column Viral RNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

 

产品介绍:

高效柱式病毒RNA纯化

样本核酸提取产品特点

本产品是在一管式病毒 RNA提取试剂盒 的基础上开发的、专门用于

从血清(血浆)等液体样品中提取微量病毒 RNA 的产品,它具有下列特点:

1. 操作简单,整个过程只需要 20 分钟左右,不需要额外在洗柱液中补加

乙醇。

2. 灵敏度高,通过 RT-PCR 检测到的最终灵敏度可以达到 50 拷贝/mL。

3. 安全无毒,不需要使用苯酚

等有机溶液。

4. 如果加上病毒离心富集步骤,最多可以处理 1.5 mL 液体病毒样品。

5. 与 RT-PCR 和荧光 RT-PCR 兼容。

6. 价廉物美,性价比远低于国外同类产品。

7. 适用于各种材料,包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞

上清液等无细胞材料。

 

运输及保存 常温运输和保存,RNA 病毒裂解液长期(1 周)放置需放 4℃,有效期一

年。

自备试剂 无

使用方法 1. 如果有 N 个样品,标记 N+2 个 1.5-2 mL 螺旋盖塑料离心管(如

Sarstedt CAT#:782.694.006),多出的一个为阳性对照,一个为阴性

对照。为避免污染,建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做

个标记,以在后续操作时区别向心面和离心面。然后各加入 0.2 mL

液体样品(血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等等)。

1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各种拭子样品,则将拭子放入

0.2mL 自备生理盐水中挤压出液体,然后取 0.2mL 进行提取。

1.2、 如果是粪便等半固定样品,则取约 0.3mL 的样品,加入 0,3

自备生理盐水,震荡重悬,离心取 0.2mL 上清进行提取。

1.3、 如果血液,细胞培养液等含细胞的液体,可以离心用上清,也

可以直接取用,但后者提取的 RNA 中有细胞的基因组 DNA 污

染。血浆的抗凝剂必须是 EDTA 或 ACD,不能是肝素。使用

ACD 时由于所加入 ACD 会增加体积,样品会被稀释,得到的

病毒滴度会比使用 EDTA 低 15%左右。血浆按 0.6mL/

管的量分装保存,以避免反复冻融。

1.4、 如果样品是实体组织或培养细胞,则需要在自备生理盐水中匀

浆后离心,用 0.2mL 上清液(含病毒)进行提取,但此种情

况下后得到的 RNA 不可避免的会含有基因组 DNA 污染。

1.5、 如果液体样品中的病毒需要富集,可以使用 1.5 mL 上述方法

得到的液体在 4℃ 24,000 g 冷冻离心 60 分钟, 移弃 1.3 mL、

用剩下的 0.2mL 继续操作。

2. 加入 0.6 mL RNA 病毒裂解液,振荡 30 秒混匀后室温放置 10 分钟。

注意:RNA 病毒裂解液在 4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放

在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

3. 加入 0.8mL 上柱结合液到离心管中,颠倒混匀后转移一半的混合液

(0.8 mL)到离心吸附柱中,室温放置 2 分钟。

4. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱

放回到收集管中。

5. 将剩余的另外一半裂解液(0.8mL)转移到离心吸附柱中,室温放置 2

分钟。

6. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱

放回到收集管中。

7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rmp 室温离心 1

分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。

8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rmp 室温离心 1

分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。此为第

二次洗涤,可以跳过。

9. 12000 g 室温离心半分钟。

10. 在离心吸附柱的滤膜的中部加入 30-100 uL RNA 洗脱液,然后将离

心吸附柱套入一新的 1.5 mL 离心管中,室温放置 2 分钟。

11. 12000 g 室温离心 1 分钟,离心管中收集的样品即为 RNA。

12. RNA 样品可以直接用于 RT-PCR 或逆转录反应,也可放-80℃长期保

存。

相关资料 常见人类疾病相关 RNA 病毒

病毒 疾病名称 类型 长度(Kb)

Measles virus measles ssRNA 4.5~85

Hepatitis A

Virus hepatitis type A ssRNA 7.5

Poliomyelitis

virus polio ssRNA 7.8

Rubella virus German measles ssRNA 7.9

Hepatitis C

Virus hepatitis type C ssRNA 9.3~9.4

Human

immunodeficien

cy virus

AIDS ssRNA 9.7

Dengue Virus dengue ssRNA 11

Yellow fever

virus yellow fever . ssRNA 11

Rabies virus rabies ssRNA 11.9

Influenza A

virus influenza ssRNA 13.5

Mumps virus mumps ssRNA 15.4

Ebola virus

virus

hemorrhagic

fever

ssRNA 19

疑难解答 Q:提取液体样品/病毒核酸(RNA 或 DNA)为何很难?

A:原因一是量少。病毒颗粒中的 RNA 或 DNA 是作为遗传物质保存,每

个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种 RNA 分子,每种

RNA 有很多拷贝),同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分

之一),样品中病毒数往往又不是很多,使得样品中病毒核酸的量往

往比一个细胞中核酸的还少,所以操作中十分容易丢失。另外,

由于得到的核酸量很少,不能使用电泳和测 OD 检测,只能通过

PCR 或 RT-PCR 检测,而 PCR 或 RT-PCR 的条件又需要优化,所以

要确定提取是否成功十分不容易。


 

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