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柱式细菌RNA提取试剂盒

柱式细菌RNA提取试剂盒

简要描述:

柱式细菌RNA提取试剂盒


英文名称:

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式细菌RNA提取试剂盒 

产品介绍:

柱式法纯化各种细菌总RNA

柱式细菌RNA提取试剂盒 

产品及特点 

本产品是细菌 RNA提取试剂盒柱式升级产品,用于快速从各种常见的中提取总 RNA。跟细菌 RNAout 相比 它具有下列特点:

1. 操作更加简单快速,省去了最费时的离心步骤。一般只需 30-40 分钟

完成。

2. 既可用于革氏阴性细菌,也可用于革氏阳性细菌。

3. 所得 RNA 纯度更高,OD260/OD280 一般在 2.0 左右. 4. 一般不含基因 DNA 和蛋白质污染。

5. 性价比高于进口同类产品,适用于各种革氏阴性细菌。

6. 可用于后续 RT-PCR、Northern Blot、芯片分析、体外翻译、polyA

筛选和 RNase 保护分析等试验。 

运输及保存 常温运输,收到货后,溶液 A 长期保存需要放 4℃,溶菌酶干粉长期保存需要

放-20℃,有效期一年。 自备试剂 绿仿。 使用方法 注意:试验所用的实验室环境、耗材等均需要 RNase-free。操作步骤是针对

在 1.5 mL 塑料离心管中进行的微量提取。

1. 新鲜配制溶菌酶溶液:根据样品数量用自备的 TE 缓冲液和本试剂盒提

供的溶菌酶干粉配制合适体积的、浓度为 4mg/mL 的溶菌酶溶液,放冰

上待用。一次革氏阳性细菌 RNA 小量提取需要 100uL 溶菌酶溶液,一

次革氏阴性细菌 RNA 小量提取需要 10uL 溶菌酶溶液。未用完的溶菌酶

溶液不建议保存后重复使用。

2. 在 1.5 mL 塑料离心管中离心收集 0.2-1.5 mL 新鲜细菌(细菌总数不

得超过 1×10E9 个细菌)。注意:由于细菌 RNA 半衰期十分短,只有

2-5 分钟,所以必须使用新鲜的、处于对数生长期的细菌才能提到高

质量的 RNA。细菌必须立即使用,不能静置。

3. 吸尽液体培养基,如果是革氏阳性细菌,则加入 100uL 第 1 步制备的

4mg/mL 的溶菌酶溶液,彻底重悬细菌,常温放置 5-10 分钟。如果是

革氏阴性细菌,则加入 90uL TE 缓冲液和 10uL 第 1 步制备的 4mg/mL

的溶菌酶溶液,彻底重悬细菌,常温放置 3-5 分钟。

4. 加入 0.3mL 溶液 A,用枪充分吹打细菌沉淀,确保细菌全部裂解,没有

块状物。此时裂解物总体积是 0.4mL。

5. 加入约 0.2 倍体积的自备绿仿(10.4mL 裂解物需 0.1 mL 绿仿),振荡器

上充分振荡混均 30 秒。

6. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟。

7. 将上清液(约 0.3mL)转移到离心吸附柱中。注意:离心后下层有机相

和中间层含有 DNA 和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和 DNA 污

染。

8. 加入等体积(约 0.3mL)的溶液 B,充分混匀后全部上柱。

9. 12000-15000 g 室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。

10. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中

的 穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比

值不高,可以再用 0.3 mL 通用洗柱液重复此步一次。

11. 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗

柱液会影响 RNA 的使用。

12. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 收集管中,加入 30-100 uL

RNA 洗脱液,室温放置两分钟。

13. 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即使用或存放于

-80℃待用。

14. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使

用甲醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子

(BioTechniques,28:414,2000)。

15. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之

间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度(1

OD260 的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体

积)和产率(RNA 产量/组织用量)。

16. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1

之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则

分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。

 

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