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一管式病毒RNA提取试剂盒

一管式病毒RNA提取试剂盒

简要描述:

一管式病毒RNA提取试剂盒


英文名称:

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品时间:2020-03-25

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一管式病毒RNA提取试剂盒

产品介绍:

在一个试管内沉淀法纯化病毒RNA

一管式病毒RNA提取试剂盒

产品及特点

 本产品是专用于血清(血浆)等液体样品中提取病毒 RNA 的纯化试剂。本产品回

收率高,尤其适合于整合到临床 RT-PCR 检测试剂盒中。且能用于提取其他液体样

品和微量样品。

1. 适用于血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等液体样品。

2. 回收率达到 90%以上,高于绝大部分基于离心柱的提取方法。

3. 灵敏度高,RT-PCR 检测到的最终灵敏度可以达到 50-100 拷贝/mL(对 HIV 和

HCV)。

4. 一管式操作,不使用离心柱,整个操作过程均在室温下完成。

5. 无毒环保,不需要使用苯酚和绿仿等有毒的有机溶液。

6. 可放量,如果加上病毒离心富集步骤,每管最多可以处理 1.5 mL 液体样品。

规格及成分 成 份 编 号 塑料袋包装

 

使用方法 1. 如果有 N 个样品,标记 N+2 个 1.5-2 mL 螺旋盖塑料离心管,多出的一个为阳性对照,一个为阴性对照。为避免污染,

建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做个标记,以在后续操作时区别向

心面和离心面。

2. 在离心管中分别加入 0.2 mL 液体样品(血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼

泪等等),阳性对照和阴性对照。

1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各种拭子样品,则将拭子放入 0.2mL 自

备生理盐水中挤压出液体,然后取 0.2mL 进行提取。

1.2、 如果是粪便等半固定样品,则取约 0.3mL 的样品,加入 0,3 自备生理

盐水,震荡重悬,离心取 0.2mL 上清进行提取。

1.3、 如果血液,细胞培养液等含细胞的液体,可以离心用上清,也可以直接

取用,但后者提取的 RNA 中有细胞的基因组 DNA 污染。血浆的抗凝剂

必须是 EDTA 或 ACD,不能是肝素。使用 ACD 时由于所加入 ACD 会

增加体积,样品会被稀释,得到的病毒滴度会比使用 EDTA 低 15%左

右。血浆按 0.6mL/管的量分装保存,以避免反复冻融。

1.4、 如果样品是实体组织或培养细胞,则需要在自备生理盐水中匀浆后离心,

用 0.2mL 上清液(含病毒)进行提取,但此种情况下得到的 RNA

不可避免的会含有基因组 DNA 污染。

1.5、 如果液体样品中的病毒需要富集,可以使用 1.5 mL 上述方法得到的液

体在 4℃ 24,000 g 冷冻离心 60 分钟, 移弃 1.3 mL、用剩下的 0.2mL

继续操作。

3. 在每个离心管中加入 0.6 mL RNA 病毒裂解液。RNA 病毒裂解液在低温放置会

产生结晶沉淀,需提前 65℃水浴溶解并充分摇匀后取用。

4. 室温放置 10 分钟裂解病毒。

5. 振荡数秒后加入 0.7 mL 室温异丙醇,旋紧盖后振荡 30 秒混匀,把离心管的向

心面对向转头的中央,13,000-15,000 g 室温离心至少 15 分钟。

6. 小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的 RNA 沉淀(此时可能看不见)。

7. 加入 1.0 mL 室温 70%乙醇, 振荡数秒后 15,000 g 室温离心 5 分钟。注意:

在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。

8. 小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的 RNA 沉淀(此时呈膜状沉淀)。

9. 再短暂离心数秒, 用移液器移弃残留液体(70%乙醇),否则它会影响后续反应。

10. 加入 200 μl RNase-free 水或天泽基因的 1×液相 RNase Erasol(能灭活残留

的 RNase, 而 RNase-free 水无此功能),用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁

离心面的膜状 RNA 沉淀,溶液将呈混浊状,含少量不溶物。由于不溶沉淀物中含

有 RNA,所以不要离心后取上清使用,必须取混合液使用,哪怕很浑浊。

11. 直接取适量用于 RT-PCR,如果溶于200 uL水,同时样品使用量不超过 RT-PCR

体系的 1/2,不溶物一般不会影响 RT-PCR。剩余样品可以室温放置 2 小时,

也可保存于-80℃保存一个月。

 

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