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柱式藻类RNA提取试剂盒

柱式藻类RNA提取试剂盒

简要描述:

柱式藻类RNA提取试剂盒


英文名称:Column Algal RNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式藻类RNA提取试剂盒

产品介绍:

提取各种藻类的总RNA

柱式藻类RNA提取试剂盒

产品及特点 

本产品是针对藻类 RNA 提取开发的高效 RNA 提取

试剂。

1. 操作更加简单快速,处理一个样品只需要约十分钟。

2. RNA 纯度更高,平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右,能够有效去除大

多数藻类中的多糖污染。

3. 适用于常见的各种海水和淡水藻类的 RNA 提取。

4. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验。

5. 性价比高于进口的柱式藻类 RNA 提取产品。

 

注:溶液 B 为淡黄色液体,使用前请观察颜色是否正常。若溶液 B 有油粒状颗

粒及分层,属正常现象,不影响使用。

运输及保存 常温运输和保存,溶液 B 需要 4℃保存,有效期一年。

自备试剂 绿仿。

使用方法 1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要 100-200 mg 藻类(湿重)。

注意海水藻类需要用纯净水洗涤 2 次以免藻类沉淀中残留的海水盐分干

扰柱式藻类 RNA 提取溶液 A 的作用。

2. 液氮研磨破碎样品:取 100-200mg 离心得到的新鲜藻类细胞沉淀放入含

液氮的研钵中,迅速将其研磨成粉末后,将粉末转移到标记的塑料离心管

中,加入 1 mL 柱式藻类 RNA 提取溶液 A,立即剧烈振荡 20 秒,充分

混匀。注意:柱式藻类 RNA 提取溶液 A 在 4℃放置后容易产生沉淀,使

用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

3. 将液氮研磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中。

4. 在离心管中加入 0.3 mL 的柱式藻类 RNA 提取溶液 B 和 0.2 mL 自备绿

仿,在振荡器上振荡 30 秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状(颜色将根据

提取的藻类不同而不同)。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。

5. 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟,两相间将有细胞破碎物。

6. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中,下层有机

相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。留下

100 uL 上清液不取。

7. 加入等体积的柱式藻类 RNA 提取溶液 C,充分颠倒混匀。如果有沉淀产

生(对某些含糖量高的藻类,属于正常现象),千万不要去掉沉淀,一定

要把所有的混合物上柱。

8. 先将一半的溶液(如果有沉淀,则将一半的悬浊液)转移到离心吸附柱中,

13000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液。

9. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中,13000-15000 g 室温离心

半分钟,弃穿透液。

10. 加 0.7 mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。再加 0.3 mL 通用

洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可,但如

果在第 7 步加入柱式藻类 RNA 提取溶液 C 后有沉淀产生,则需要洗三次,

每次加入的通用洗涤液的量分别为 0.4、0.3 和 0.3 mL。

11. 室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。

12. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中,加入 50-100 uL RNA 洗脱

液,室温放置 1-2 分钟。

13. 13000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以

立即使用或存放于-80℃待用。

14. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使

用甲醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子

(BioTechniques,28:414,2000)。如果电泳发现 DNA 污染严重(跟

样品相关)建议使用含有 RNase-free DNase 处理步骤的柱式藻类

RNAout 2.0 ( CAT#:90404 ), 也 可 以 另 购 膜 结 合 DNA 清除剂

(CAT#90904)。

15. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之

间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260

的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA

产量/组织用量)。

16. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之

间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分

别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。

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