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柱式植物RNA提取试剂盒

柱式植物RNA提取试剂盒

简要描述:

柱式植物RNA提取试剂盒


英文名称:Column Plant RNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式植物RNA提取试剂盒

产品介绍:

柱式法纯化各种植物总RNA

柱式植物RNA提取试剂盒

产品及特点 

本产品它结合了植物 RNA提取试剂盒 的高效性(其效果在近五十多种各类植物中得到验证

该产品特点如下:

1. 操作更加简单快速,处理一个样品只需要约十分钟,比植物 RNAOUT 快一

倍。

2. RNA 纯度更高,平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右,能够有效去除大

多数植物中的多糖污染。

3. 适用于所有用植物 RNAOUT 能提出 RNA 的植物(注:对有些植物可能需要

在溶液 A 中额外添加 RVC)。

4. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验。

5. 性价比高于进口的柱式植物 RNA 提取产品。

6. 由于小 RNA 太短很难上柱,故如果要提取小 RNA 需要用本公司专门的

试剂盒。

 

运输及保存 常温运输和保存,溶液 B 需要 4℃保存,有效期一年。

自备试剂 绿仿。

使用方法 1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要 100-200 mg 植物叶片、

或 50-100 mg 植物种子、或 200-500 mg 植物果实。

2. 样品破碎:

1) 匀浆法:先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在 RNALOCKER 中的植物

组织需用纸吸去 RNALOCKER 液体后再剪切成小块),放入 10-15 mL

塑料离心管中,加入 1 mL 溶液 A,然后用匀浆器匀浆 5-20 秒。匀

浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。

2) 液氮研磨法(适用于复杂,易降解样品):取适量新鲜植物组织放入

含液氮的研钵中,迅速将组织研磨成粉末后,将粉末转移到合适的塑

料离心管中,加入 1 mL 柱式植物 RNA 提取溶液 A,立即剧烈振荡

20 秒,充分混匀。

注意:溶解柱式植物 RNA 提取溶液 A 沉淀。柱式植物 RNA 提取溶

液 A 在 4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在 65℃水浴使沉

淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

3. 将匀浆物或液氮研磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中(可以不必转

移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份,匀浆

液会多于 1 mL,转移时也只取 1 mL。

4. 在离心管中加入 0.3 mL 的柱式植物 RNA 提取溶液 B 和 0.2 mL 自备绿

仿,在振荡器上振荡 30 秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡

时必须使管底溶液震荡起来。

5. 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟,两相间将有约 5-10 毫米厚的细胞

破碎物。

6. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中,下层有机

相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。留下

100 uL 上清液不取。

7. 加入等体积的柱式植物 RNA 提取溶液 C,充分颠倒混匀。如果有沉淀产

生(对某些植物,属于正常现象),千万不要去掉沉淀,一定要把所有的

混合物上柱。

8. 将一半的溶液(如果有沉淀,则先混匀)转移到离心吸附柱中,

13000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液。

9. 将剩下的一半溶液(如果有沉淀,则先混匀)转移到同一离心吸附柱中,

13000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液。

10. 加 0.7 mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。再加 0.3 mL 通用

洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可,但如

果在第 7 步加入柱式植物 RNA 提取溶液 C 后有沉淀产生,则需要洗三次,

每次加入的通用洗涤液的量分别为 0.4、0.3 和 0.3 mL。

11. 室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。

12. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中,加入 50-100 uL RNA 洗脱

液,室温放置 1-2 分钟。

13. 13000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以

立即使用或存放于-80℃待用。

14. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使

用甲醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子

(BioTechniques,28:414,2000)。

15. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之

间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260

的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA

产量/组织用量)。

16. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之

间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分

别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。

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