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柱式真菌RNA提取试剂盒

柱式真菌RNA提取试剂盒

简要描述:

柱式真菌RNA提取试剂盒


英文名称:Column Fungal RNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式真菌RNA提取试剂盒

产品介绍:

柱式法纯化各种真菌总RNA

柱式真菌RNA提取试剂盒

产品及特点:

1. 柱式操作,更加简单快捷,整个过程只需要约 30 分钟。

2. RNA 纯度高,OD260/280 一般都在 2.0 左右,可直接用于 RT-PCR、

Norther 杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。

3. RNA 产量高,一般在 20-70 ug/mL 酵母培养物(约 2.0 ×107个细胞)。

4. 非酶细胞破裂法,适用于各种形态和各个种属的真菌及革兰氏阳性

细菌,包括 Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、

Schizosaccharomycespombe、Pichiapastoris、Bacillus

subtilis、Staphylococcusaureus 等。

运输及保存 常温运输,4℃保存,有效期一年。

自备试剂 绿仿。

使用方法 1. 将 50 mg 左右的干菌丝(或 100 mg 左右的鲜菌丝、或适当数量的真菌

菌落)转移到 1.5 mL 塑料离心管中。如果是液体真菌培养物,则直接将

1-10 mL 液体真菌在 1.5 mL 塑料离心管中 12000-15000 g 离心 1 分

钟,并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。

2. 加入 0.4 mL 溶液 A 并充分吹打混匀。如果 A 溶液存放时产生沉淀,请

置于 65℃融化,用前充分摇晃均匀。

3. 加入 0.4 mL 溶液 B,剧烈振荡 30 秒。

4. 65℃保温 5 分钟。

5. 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟,转移上清到一干净的 1.5 mL 塑

料离心管中。

6. 再加入 0.1 mL 溶液 B 和 0.1 mL 自备绿仿,振荡混匀 30 秒。

7. 室温12000-15000 g离心3-5分钟,转移上清到一自备的、干净的5 mL

塑料离心管中。

8. 加入相当于上清 3 倍体积的溶液 C(约 1.2-1.5 mL)和 1 倍体积的溶

液 D(约 0.4-0.5 mL),充分混匀。

9. 将 混合 液(约 2.5mL)分 3-4 次转 移 到 离心 吸 附 柱 中。 每次

13000-15000 g 室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。

10. 用 0.5 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中

的穿透液。

11. 一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高,可以

再用 0.5 mL 通用洗柱液重复此步一次。

12. 室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的洗柱液会影响 RNA 的使用。

13. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 1.5 mL 塑料离心管中,加入

30-100 uL RNA 洗脱液。

14. 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即使用或存放于

-80℃待用。

15. RNA 完整性的电泳检测:

如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电

泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子(BioTechniques,28:

414,2000)。如果是简单检测,可以使用 TAE 或天泽基因的

SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液,但文献报道必须使用变性

上样液(BioTechniques,9:558,1990)。普通 DNA 上样液不含变性

剂,也没经过去 RNase 处理,所以不要使用。 尤其需要注意的是不

要使用 TBE 进行 RNA 电泳,因为 TBE 所含硼酸 是研究多糖的经典方

法----硼酸络合法中的关键成分,硼酸通过与 RNA 核糖中的羟基发生络

合反应,形成 RNA 分子内或 RNA 分子间的络合复 合物,使同样长度的

RNA 具有不同的泳动速度,电泳条带弥散,同时有 大的 RNA 络合复合

物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组 DNA 污 染)。RNA 分子内或

RNA 分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼酸 与 RNA 的数量比例

有关,而 RNA 样品中污染的其他多糖也会参与此反 应,使硼酸对 RNA

电泳的影响更复杂,所以 TBE 对 RNA 电泳的影响 没有规律性和重复性。

有的样品可以使用有的又不行,避免使用。

16. RNA 产量产率测定:

将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260

的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度(1 OD260 的 RNA=40

μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/细

菌用量)。注意不要将 RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260 和 OD280,

否则光吸收比在 TE 中测得的低 10%-15%。

17. RNA 纯度测定:

无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与

其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),OD260/OD230 一般在

2.0-2.3 之间,如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或

多糖的污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。蛋白质污染可以通过酚/

绿仿抽提一次然后酒精沉淀去除,DNA 和多糖污染可以分别用天泽基

因的 DNA Erasol 和 PS Erasol 去除。测 OD 时 RNA 不能过度稀释

使 OD 读数低于仪器的有效范围

 

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