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无酚无绿仿柱式植物RNAout

无酚无绿仿柱式植物RNAout

简要描述:

无酚无绿仿柱式植物RNAout


英文名称:

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品时间:2020-03-25

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无酚无绿仿柱式植物RNAout

产品介绍:

用于提取各种植物RNA

无酚无绿仿柱式植物RNAout

产品及特点

 本产品是在柱式植物RNA提取试剂盒的基础上经过配方和流程优化得到的无绿仿升级产品,它结合了植物RNA提取的高效性、快捷性以

及无绿仿处理的安全性。该产品特点如下:

1. 免酚和绿仿处理,操作安全可靠。

2. 简单快速,处理一个样品只需要约十分钟。

3. RNA 纯度更高,平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右,能够有效去除

大 多数植物中的多糖污染。

4. 目前已测试过上百种植物。

5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交和cDNA合成等实验。

6. 性价比高于进口的柱式植物 RNA 提取产品。

运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。

自备试剂 无

使用方法 1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要 50-100 mg 植物叶片、或

30-50mg 植物种子、或 100-200mg 植物果实。不能多加,否则容易堵

柱。无绿仿提取处理的量比常规的加绿仿处理量要少一倍,否则非常容易

堵柱,但是否堵柱又取决于植物组织的多糖多酚的浓度。

2. 样品破碎:

1) 匀浆法:先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在 RNALOCKER 中的植物

组织需用纸吸去 RNALOCKER 液体后再剪切成小块),放入 10-15 mL

塑料离心管中,加入 1 mL 溶液 A,然后用匀浆器匀浆 5-20 秒。匀

浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。

2) 液氮研磨法(适用于复杂,易降解样品):取适量新鲜植物组织放入

含液氮的研钵中,迅速将组织研磨成粉末后,将粉末转移到合适的塑

料离心管中,加入 1 mL 溶液 A,立即剧烈振荡 20 秒,充分混匀。

注意:如果不小心将溶液 A 放置在 4℃,则可能会产生沉淀,使用前

必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

3. 将匀浆物或液氮研磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中(可以不必转

移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份,匀浆液

会多于 1 mL,转移时也只取 1 mL。

4. 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟,管底沉淀为细胞破碎物。

5. 将上清液(约 1 mL)转移到另一干净的 2 mL 塑料离心管中。

6. 加入等体积的溶液 B,充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物,属

于正常现象),千万不要去掉沉淀,一定要把所有的混合物上柱。

7. 将 0.7mL 的混合溶液转移到离心吸附柱中,14000-15000 g 室温离心 3

到 5 分钟,弃穿透液。如果离心吸附柱里面有残留液体没穿透,可以延长

离心时间直到彻底穿透。

8. 将剩下的混合溶液按每次 0.7mL 的方式转移到同一离心吸附柱中, 每次

13000-15000 g 室温离心 3-5 分钟,弃穿透液。

9. 由于混合液有 2mL 左右,所以三次转移即可将混合液全部挂柱。

10. 加 0.7 mL 通用洗柱液,室温 13000-15000 g 离心半分钟,弃穿透液。

如果离心吸附柱里面有残留液体没穿透,可以延长离心时间直到彻底穿

透。

11. 再加 0.3 mL 通用洗柱液,室温 13000-15000 g 离心半分钟,弃穿透液。

12. 12000 rpm 室温离心 10 秒以便去除残留液体。此步很重要,否则残留

的乙醇会影响 RNA 的使用。

13. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中,加入 50-100 uL RNA 洗脱

液,室温放置 1-2 分钟。

14. 13000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立

即使用或存放于-80℃待用。

15. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使用

甲醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子

(BioTechniques,28:414,2000)。

16. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之

间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260

的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA

产量/组织用量)。

17. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之

间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分

别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。

 

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