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柱式软骨RNA提取试剂盒

柱式软骨RNA提取试剂盒

简要描述:

柱式软骨RNA提取试剂盒


英文名称:Column Cartilage RNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式软骨RNA提取试剂盒

产品介绍:

提取各种动物软骨的总RNA

柱式软骨RNA提取试剂盒

产品及特点 

本产品专门从各种软骨组织样品中快速提取总 RNA 的试剂盒,它能有效

克服传统 TRIzol 方法提取软骨组织 RNA 时,十分容易产生糖蛋白和酸性多糖

污染这一缺点。

1. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染,OD260/280 一般均在 1.9 以上。

2. RNA 产率一般为 5-15 ug/100 mg。

3. 操作简单,整个提取过程一般只需要 10 多分钟。

1. 得到的 RNA 可以直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、mRNA 纯化、

Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation 等研究。

运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。溶液 B 4℃保存。

自备试剂绿仿。

使用方法 1. 先将 50-200 mg 新鲜或冷冻的软骨组织液氮研磨成粉,加入 1 mL 溶液

A 溶解(溶液 A 使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并摇晃混匀),

然后将研磨物转移到新的 1.5 mL 离心管中, 振荡混合 30 秒。也可以将

软骨组织剪碎后与溶液 A 一起用 Polytron 匀浆机(内切式匀浆机)匀浆

5-20 秒,再转移到 1.5 mL 离心管中。匀浆时会产生泡沫,但不影响提

取效果。

2. 在离心管中加入 0.3 mL 的溶液 B 和 0.2 mL 自备绿仿,在振荡器上振荡

30 秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震

荡起来。

3. 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟,两相间将有约 5-10 毫米厚的细胞

破碎物。

4. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中,下层有机

相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。留下

100 uL 上清液不取。

5. 加入等体积的溶液 C,充分颠倒混匀。

6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中,12000-15000 g 室温离心半分钟,

弃穿透液。

7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中,12000-15000 g 室温离心

半分钟,弃穿透液。

8. 加 0.7 mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。

9. 加 0.3 mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。此步可以省略。

10. 室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。

11. 将离心吸附柱转移到自备的 RNase-free 离心管中,加入 50-100 uL RNA

洗脱液,室温放置 1-2 分钟。

12. 12000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以

立即使用或存放于-80℃待用。

13. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使

用甲醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子

(BioTechniques,28:414,2000)。

14. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之

间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度(1 OD260

的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA

产量/组织用量)。注意:测定 OD 时不要稀释过度,否则浓度会在仪器能

测的范围之外。本方法提取的 RNA 测 OD 时一般最多只能稀释 10-20 倍。

15. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之

间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分

别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。

 

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