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石蜡包埋组织RNA提取试剂盒

石蜡包埋组织RNA提取试剂盒

简要描述:

石蜡包埋组织RNA提取试剂盒

英文名称:

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品时间:2020-03-25

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石蜡包埋组织RNA提取试剂盒

产品介绍:

柱式法纯化各种石蜡切片的总RNA

石蜡包埋组织RNA提取试剂盒

产品及特点 

石蜡包埋组织本是珍贵的分子生物学研究材料,但是由于它们的保存时间一般都比较长,很不容易从中提取到可以进行 PCR 的 RNA,存在的主要问题是 RNA

的降解和脱蜡过程中样品的丢失。本产品是专门用于从甲醛和非甲醛固定的石蜡包

埋组织中快提 RNA 的试剂,具有下列特点:

1. 一管式操作,避免了可能的交叉污染和样品 RNA 的丢失。

2. 含一步离心式脱蜡试剂,不需要使用有毒的二甲苯,健康环保。

3. 能有效去除基因组 DNA 的污染,得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR 反应。

4. 即开即用,客户自己不需要准备额外的试剂。

 

运输及保存 低温运输,4℃保存(溶液 C 需要-20℃放置),有效期一年。

自备试剂 绿仿、75%乙醇。

使用方法 1. 将 5 片厚度为 6-8 um 的石蜡包埋组织切片转移到 1.5 mL 塑料离心管(

使用螺旋盖离心管)中并加入 1 mL 溶液 A,在振荡器上以大速度振荡 10 秒。

2. 加入 75 uL 溶液 B,在振荡器上以大速度振荡 10 秒。

3. 7000×g 室温离心 2 分钟,溶液将形成两个相,其中组织切片位于下相。

4. 小心吸弃上层液体。

5. 将离心管放入真空抽干机中抽干下层的液体,一般需要一小时。

6. 加入 150 uL 溶液 C,55℃保温过夜。

7. 短暂离心,95℃保温 10 分钟。

8. 加入 0.5 mL 溶液 D,充分震荡半分钟。

9. 加入 0.1 mL 自备绿仿,振荡器上充分振荡混均 30 秒。

10. 13000-5000×g 室温离心 3-5 分钟。

11. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中。下层有机

相(蓝色)和中间层含有 DNA 和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和 DNA

污染。为保险起见,可以留下 100 uL 上清液不取。同时吸取上清时缓慢

进行,否则容易吸出交界面的不可见的 DNA。

12. 在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂,振荡器上振荡 30 秒混匀。

13. 13000-15000 g 室温离心 5 分钟,离心底的侧面将形成 RNA 沉淀。如果需

要提高 RNA 回收率,可以将离心时间延长到 20 或 30 分钟。

14. 小心吸弃上清液,注意不要吸弃 RNA 沉淀。

15. 在含 RNA 沉淀的离心管中加入 1mL 自备的 75%乙醇,振荡混匀 30 秒。

16. 13000-15000 g 室温离心 1 分钟。

17. 小心吸弃上清液,注意不要吸弃 RNA 沉淀。

18. 短暂快速离心,用移液枪小心吸弃残留乙醇(约 50 uL)。注意不要吸弃沉淀。

此步十分重要,否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。

19. 室温放 1-2 分钟后立即加入 50-100 uL RNA 溶解液使 RNA 沉淀溶解。千万

不要用真空离心法使 RNA 沉淀过于干燥,否则 RNA 将变得十分难溶。样品立

即使用或存放于-80℃待用。

20. RNA 完整性的电泳检测:

21. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检

测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度(1 OD260 的

RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度×体积)和产率(RNA 产量/

组织用量)。

22. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具

体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品

可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。

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