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柱式动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)

柱式动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)

简要描述:

柱式动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)


英文名称:

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)

产品介绍:

柱式法纯化各种动物组织的总RNA

柱式动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)

产品及特点 

本产品是动物总 RNA 快速提取试剂动物的柱式升级产品,可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总 RNA。跟动物 RNAOUT 相比其主要特点是:

1. 操作更加简单快速,整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。

2. RNA 纯度更高,OD260/OD280 一般在 2.0 左右。

3. 一般不含用 RT-PCR 可以检测到的基因组 DNA 污染。

4. 适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。

5. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实

6. 性价比高于进口的柱式 RNA 提取产品。

7. 可以进行无绿仿操作,只是纯度稍微降低,但不影响使用。

运输及保存 常温运输和保存,溶液 A 需要放 4℃长期保存,有效期一年。

自备试剂 绿仿。

使用方法 下面的操作步骤是针对在 1.5 mL 塑料离心管中进行的微量提取的,如果处理

样品量大,请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。

1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用:

a) 对贴壁细胞:吸尽培养液,在每 10 平方厘米细胞中加入 1 mL 柱式动物

RNAout 溶液 A,用枪轻柔吹打数次,确保细胞全部裂解并且让基因组

DNA 充分断裂。

b) 对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每 1-5×106悬浮细胞中加入

1 mL 柱式动物 RNAout 溶液 A,用枪轻柔吹打数次,确保细胞全部裂解

并且让基因组 DNA 充分断裂。如果是 fibroblasts 或 carcinoma cell,

1 mL 溶液 A 的细胞使用量不要超过 1×106个细胞。

c) 对新鲜组织:先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入 10 mL 或

15 mL 塑料离心管中,每 50-100 mg 组织加 1 mL 柱式动物 RNAout

溶液 A,用 Polytron 剪切式匀浆器匀浆 30 秒左右。对肝、脾、胰、肾等

细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的 DNA),建议组织的

使用量不要超过 50 mg/ mL 柱式动物 RNAout 溶液 A,否则十分容易产

生 DNA 污染。也可以用液氮研磨:在研钵中加入液氮,再加入 50-100mg

新鲜组织,然后研磨成粉后转移到 1.5mL 离心管中,再加入 1mL 柱式动

物 RNAout 溶液 A,震荡 30 秒混匀。

d) 对 RNALOCKER 保存组织:先用纸吸去 RNALOCKER 液体后再剪切成小块,

其余操作同新鲜组织的处理。

2. 如果进行无绿仿操作(所得 RNA 纯度稍低,但一般不影响后续使用),则

将上步所得的细胞裂解物或匀浆液转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管

中,12,000 rpm 室温离心 3-5 分钟。

3. 如果进行带绿仿操作(所得 RNA 纯度比免绿仿操作稍高),则将上步所得

的细胞裂解物或匀浆液转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中,然后加

入0.2倍体积的自备绿仿(1 mL柱式动物RNAout溶液A需0.2 ml绿仿),

振荡器上充分振荡混均 30 秒,12,000 rpm 室温离心 3-5 分钟。

4. 将上清液转移到一个干净的 2 mL 塑料离心管中。注意:无绿仿操作时,

离心后管底是细胞碎片和结缔组织纤维。带绿仿操作时,离心后分上下层,

下层有机相和上下层中间含有 DNA 和蛋白质,吸取上清时避免触及,否

则将产生蛋白质和 DNA 污染。为保险起见,可以留下 100 uL 上清液不

取。同时吸取上清时缓慢进行。

5. 加入等体积的柱式动物 RNAout 溶液 B,充分颠倒混匀。

6. 分次(一般需要 2-3 次)将加入柱式动物 RNAout 溶液 B 后的混合液转

移到离心吸附柱中,12,000 rpm 室温离心半分钟,弃穿透液。如果溶液

粘稠,可以延长离心时间到 2 分钟。

7. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rpm 室温离心半分钟,

弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。

8. 再加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rpm 室温离心半分钟,

弃穿透液。此步可以省略。

9. 再室温 12,000 rmp 干甩半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液

会影响 RNA 的使用。

10. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free1.5mL 塑料离心管中,加入

50-100 uL RNA 洗脱液。

11. 室温 12,000 rmp 离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即

使用或存放于-80℃待用。

12. RNA 的电泳检测:本试剂盒提取的 RNA 用甲醛变性胶电泳,如果在

非变性的普通琼脂糖胶(in TAE 或 TBE buffer)上电泳,一定要使用

RNA 上样液 RNAon(操作详见 RNAon 使用手册),千万不要使用

常用的 DNA 上样液,因为 DNA 上样液没有经过去 RNase 处理,也不能

将 RNA 变性,得到的带型将十分杂乱。

13. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使

用甲醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子

(BioTechniques,28:414,2000)。

14. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之

间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260

的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA

产量/组织用量)。

15. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之

间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分

别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。

疑难解答 Q:上样孔里的红色荧光物一定是 DNA 污染吗?

A:不是。用 TAE 或 TBE 电泳液和非变性胶电泳 RNA 时容易产生此现象,天

泽基因初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基

互补或通过硼酸络合(如果使用 TBE 作电泳液的话)形成的复合物,加

RNase 处理后,这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象,建议

使用甲醛变性胶电泳和 RNA 上样液(如天泽基因的 RNAon)。

Q:如何确认和去处除污染的基因组 DNA?

A:如果怀疑有 DNA 污染,可以用 RNase 处理 RNA 样品,然后再电泳。如

果上样孔里的红色荧光物不消失,则表示是基因组 DNA 污染。进一步确认

可以使用 PCR 扩增法。去除污染的 DNA 可以使用天泽基因的非酶的 DNA

去除剂 DNA Erasol 或 RNase-free DNase,由于 RNase-free DNase 一

般都有残留的 RNase 污染,所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操

作。

关联产品 柱式 DNA 清除剂

 

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