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柱式粪便RNA提取试剂盒

柱式粪便RNA提取试剂盒

简要描述:

柱式粪便RNA提取试剂盒


英文名称:

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式粪便RNA提取试剂盒

产品介绍:

提取粪便中的总RNA(包括肠道细胞核微生物的RNA)

柱式粪便RNA提取试剂盒

产品及特点 

由于粪便中有机质含量丰富,对 RT-PCR 等后续反应有极大的抑制作用,

所以从粪便中提取高纯度的 RNA 一直是十分棘手的问题。本产品是在天泽基

因粪便 RNAout 基础上开发的柱式粪便 RNA 提取产品,它具有下列特点:

1. 操作比非柱式法更加简单快速,处理一个样品只需要约十几分钟。

2. 去污染效果好,RNA 纯度更高,平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右。

3. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验。

4. 性价比高于进口的柱式粪便 RNA 提取产品。

5. 试剂无毒无害, 环保。 

 

运输及保存 常温运输和保存,溶液 B 长期保存需要放 4℃,有效期一年。 自备试剂 绿仿。 使用方法 1. 称取 0.5-1 g 粪便放入到含液氮的研钵中,迅速将冻成固体的粪便研磨成

粉末后。

2. 将粉末转移到 5-15mL 的塑料离心管中(不能使用玻璃离心管),加入 1

mL 65℃预热的溶液 A,立即剧烈振荡 20 秒,充分混匀。

3. 将匀浆物转移至干净的 1.5mL 塑料离心管中。

4. 在离心管中加入 0.3 mL 的溶液 B(溶液 B 用前需要摇匀,呈浑浊状)和

0.2 mL 自备绿仿,在振荡器上振荡 30 秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊

状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。

5. 室温 13000 g 离心 3 分钟,两相间将有约 5-10 毫米厚的细胞破碎物。

6. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中,下层有机

相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。留下

100 uL 上清液不取。

7. 加入等体积的溶液 C,充分颠倒混匀。如果有沉淀产生,千万不要去掉沉

淀,一定要把所有的混合物上柱。

8. 将一半的溶液(如果有沉淀,则先混匀)转移到离心吸附柱中,13000g

室温离心半分钟,弃穿透液。

9. 将剩下的一半溶液(如果有沉淀,则先混匀)转移到同一离心吸附柱中,

13000g 室温离心半分钟,弃穿透液。

10. 加 0.7 mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。再加 0.3 mL 通用

洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。

11. 室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。

12. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中,加入 50-100 uL RNA 洗脱

液,室温放置 1-2 分钟。

13. 13000g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即使用

或存放于-80℃待用。

14. RNA 完整性的电泳检测:由于粪便 RNA 含有肠道上皮细胞和肠道细菌的

RNA,它们的分子量大小不一,所以电泳时不会形成清晰的条带。

15. RNA产量产率测定:通过OD260的光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260

的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度×体积)和产率(RNA

产量/粪便的用量)。

16. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之

间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分

别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。 

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