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柱式昆虫RNA提取试剂盒

柱式昆虫RNA提取试剂盒

简要描述:

柱式昆虫RNA提取试剂盒


英文名称:

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式昆虫RNA提取试剂盒

产品介绍:

提取各种昆虫的总RNA

柱式昆虫RNA提取试剂盒

产品及特点 

本产品是专门用于从富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的动物样品(尤其是昆虫样

品)中提取总 RNA 的试剂。该产品特点如下:

1. 操作简单快速,处理一个样品只需要约十分钟。

2. RNA 纯度高,平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右,能够有效去除大多数

昆虫中的多糖污染。

3. 适用于各种昆虫组织,每 100mg 组织能提取到 20-30ug 总 RNA。

4. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验。

5. 一站式,提供 RNase-free 的样品收集管。

 

运输及保存 常温运输和保存,溶液 B 放 4℃长期保存,有效期一年。 自备试剂 绿仿。 使用方法 1. 将 50-300mg 昆虫组织放入 10-15 mL 塑料离心管中,加入 1 mL 溶液 A,

然后用匀浆器匀浆 5-20 秒。匀浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。也可

以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织,砚磨完后加入 1 mL 溶液 A。注意:溶解

溶液 A 沉淀。溶液 A 在 4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在 65℃

水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

2. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中(可以不必转移非液

体的细胞碎片)。

3. 在离心管中加入 0.3 mL 的溶液 B 和 0.2 mL 自备绿仿,在振荡器上振荡

30 秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡

起来。

4. 室温 12,000 rmp 离心 3-5 分钟,两相间将有约 5-10 毫米厚的细胞破碎物。

5. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中,下层有机相

和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。留下 100 uL

上清液不取。

6. 加入等体积的溶液 C,充分颠倒混匀。

7. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中,12,000 rmp 室温离心半分钟,弃穿透

液。

8. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中, 12,000 rmp 室温离心半分

钟,弃穿透液。

9. 加 0.7 mL 通用洗柱液,室温 12,000 rmp 离心半分钟,弃穿透液。

10. 加 0.3 mL 通用洗柱液,室温 12,000 rmp 离心半分钟,弃穿透液。此步可

以省略。

11. 室温 12,000 rmp 离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响 RNA

的使用。

12. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中,加入 50-100 uL RNA 洗脱液,

室温放置 1-2 分钟。

13. 12,000 rmp 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即使

用或存放于-80℃待用。

14. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使用甲

醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子

(BioTechniques,28:414,2000)。注意:大部分昆虫的 28S RNA 被

切割成两个小的片段,彼此用氢键相连,所以在甲醛变性胶中,没有 28S

带出现(文献见:Eva C. Winnebeck,Craig D. Millar and Guy R. Warman,Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect

Science: Vol. 10:1-7)

15. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)

检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度(1 OD260 的

RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA 产

量/组织用量)。

16. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间

(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表

示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。

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