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非冻型血液RNA保存液

非冻型血液RNA保存液

简要描述:

非冻型血液RNA保存液


英文名称:

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品时间:2020-03-25

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非冻型血液RNA保存液

产品介绍:

使血液细胞中的RNA在一定时间内不降解

非冻型血液RNA保存液

产品及特点 

由于血液富含 RNase,因此血液 RNA(主要是白细胞 RNA)非常容易降

解,是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题,本公司在非

冻型组织 RNA 保存液的基础上,开发了本产品,它具有下列特点:

1. 能快速渗透到新鲜抗凝血液中的有核细胞内(主要是白细胞),抑制 RNA

分子的降解。保存的血液白细胞 RNA 常温可放置 3 天,4℃可放置 5 天,

-20℃可放置 3 个月。

2. 操作简单,直接将本产品和白细胞样品按比例混合即可。

3. 适用于人新鲜血和哺乳动物新白细胞,不适用于陈旧血液和冻凝血液,也

不适用于禽类血液和其他动物血液。

4. 重复性好,效果跟进口同类产品相当。

5. 保存的样品可直接用本公司动物 RNA提取试剂盒 提取 RNA。 

 

运输及保存 常温运输和保存,有效期两年。

 使用方法:

一、白细胞的分离和保存

1. 本产品保存全血的效果不好,故不建议用于全血的保存。必须先分离白细

胞。

2. 室温 1500-2000 g 离心新鲜血液 10-15 分钟,最上层为血浆,最下层为

红细胞,中间层为膜状的、含白细胞的 Buffy Coat(含白细胞多的血液此

层可能很厚)。

3. 吸出血浆后,小心将中间的白细胞层吸出(允许污染少量红细胞),按 0.5

mL 白细胞加入到 2.5 mL(5 倍体积)的本产品的比例,将两者混合。

4. 如此保存的白细胞可以在常温(不超过 30℃)下放置 3 天,4℃可放置 5

天。如果需要-20℃放置,需要先在 4℃放置 1 天,然后在 13000 g 室温

离心 3 分钟,小心吸出浅粉红色的上清液,再将没有液体保存液的白细胞

沉淀放置在-20℃,如此可放置 3 个月。不能直接有液体保存液的白细胞

悬浮液放置在-20℃,否则凝固形成的冰晶将会刺破白细胞膜,在凝固的

冰晶融化时,白细胞胞浆成分(含 RNA)会进入上清,在离心时丢失,离

心得到的只是细胞残骸。

5. 使用时,对 4℃或以上温度保存的白细胞,将 1.5 mL 本产品和白细胞的

混合物转移到离心管中,13000 g 室温离心 3 分钟。小心吸出浅粉红色的

上清液,沉淀为白细胞,直接用于 RNA 提取。如果是在-20℃保存的已经

按上步方法处理的白细胞沉淀,则直接用于 RNA 提取。

二、提取 RNA(本产品不提供 RNA 提取相关产品)

6. 建议使用 Trizol 或类似 Trizol 的动物 RNA提取试剂盒。需要注意

的是在加入异丙醇沉淀 RNA 时,本产品处理的样品由于盐离子浓度高会

出现两层(即两相,正常样品会出现 RNA 沉淀,不会出现两层),小心去

除上清,然后加入相当于下层体积 2 倍的 50%的异丙醇,颠倒混匀后

13000 g 室温离心 10 分钟,RNA 将沉淀在管底。再按 Trizol 的标准操

作流程用 75%乙醇洗涤沉淀即可。

三、RNA 的检测(列出步骤仅供参考,本产品不提供相关产品)

7. RNA 完整性的电泳检测:强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳,

因为非变性胶中单链 RNA 分子会自生折叠成各种形状,尤其不能使用

DNA 上样液,因为没有经过去 RNase 处理。

8. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 用 TE 缓冲液 (pH8.2)稀释 10 倍

后检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度(1 OD260

的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA

产量/组织用量)。人血 RNA 产率一般为 2-5 ug/mL。

9. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 2.0 左右(具

体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表

示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。

 

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