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液相内毒素清除剂

液相内毒素清除剂

简要描述:

液相内毒素清除剂


英文名称:

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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液相内毒素清除剂

产品介绍:

去除DNA和蛋白溶液中的内毒素

液相内毒素清除剂

产品及特点 

去除液体生物样品(包括质粒 DNA 样品)中污染的内毒素(endotoxin)具有

重要的临床意义,因为内毒素对原代细胞、传代细胞和整体动物均具有显著的毒

性作用。由于内毒素(化学本质为脂多糖,即 lipopolysaccharides)是包括 E.coli

在内的革兰氏阴性细菌细胞壁的主要组成成分,并且带电性跟 DNA 类似,所以

从 E.coli 细胞中提取的质粒 DNA 和重组蛋白质药物中常常含有大量的内毒素污

染,并且很难用用常规方法(包括硅胶膜吸附,离子交换吸附、凝胶排阻过滤、

氯化铯超速离心)去除。本产品就是专门用于高效去除生物样品中的内毒素污染。

1. 简单快速,一次处理只需要 20 分钟左右,不需要复杂仪器设备。

2. 高效,一次处理可以去除 90%以上的内毒素,经过三次重复抽提可将内

毒素的水平降低到 0.2 EU (endotoxin unit,约 0.1 ng LPS)/mL 以

下。

3. 适用范围广,可用于 DNA、RNA、蛋白质或其他生物样品。

4. 不影响 DNA 和绝大部分蛋白质的活性,处理过的质粒 DNA 可用于转染

实验。

5. 既可小规模使用(在 1.5 mL 离心管内),也可放量使用。

 

运输及保存 常温运输和保存,有效期两年。

自备试剂 无内毒素的水或 TE 缓冲、3M 醋酸钠、乙醇

使用方法 如果使用前本产品有分层,请冰浴后振荡混匀。

一:用于体积小于 500 uL 的 DNA/RNA 样品

1. 在一干净的离心管中加入 500 uL 的样品。如果不足 500 uL,可以用水或 TE

补足。

2. 加入 50 uL 的 3 M 醋酸钠(pH 5.2),混匀后冰浴 5 分钟。

3. 加入 50 uL 预冷的本产品,充分混匀后冰浴 10 分钟。

4. 65℃水浴直到溶液变浊或出现分层为止(一般需要 1-5 分钟)。

5. 室温 12000-15000×g 离心 2 分钟(不能低温离心),离心后上层为无色透

明,下层为淡蓝色。

6. 将上清转移到新的离心管中。

7. 如果需要,可以重复步骤 3~6。

8. 加 1 倍体积的异丙醇或两倍体积的乙醇,混匀, 12000-15000×g 离心 30

分钟。

9. 弃上清后用 70%酒精洗 2 次。

10. 空气干燥沉淀后加入 100 uL 无内毒素的水或 TE 缓冲液溶解沉淀。

11. 测定 DNA 和内毒素的含量,与未纯化的样品比较。

二:用于体积大于 500 uL 的 DNA/RNA 样品

整个操作同上,只是在 15 或 50 mL 塑料离心管中进行,离心速度不能超过离

心管的承受力。

三:整合到碱变性法质粒 DNA 制备过程中

整个操作同上,只是:

1. 样品必须是加溶液 III 离心后得到的上清液或得到的质粒溶液。

2. 如果处理的是加溶液 III 离心后得到的上清液,可以略去第 2 步操作。

3. 处理后的溶液需要用试剂盒提供的或自备的上柱液调整盐离子浓度,然后上

柱,以后的操作按试剂盒提供的操作手册进行。

4. 洗脱 DNA 所用水或溶液必须无内毒素污染。

四:对蛋白质和其它生物样品

整个操作同上,只是:

1.略去第 2 步操作,加 3 M 醋酸钠(pH 5.2)的目的是为沉淀核酸。

2.第 4 步改为 37℃保温以免蛋白质变性,溶液呈混浊状或分相一般需要 20-30

分钟。

3.略去第 8 步和以后操作。

 

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