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一步法质粒DNA提取试剂盒

一步法质粒DNA提取试剂盒

简要描述:

一步法质粒DNA提取试剂盒


英文名称:One-Step Plasmid DNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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一步法质粒DNA提取试剂盒

产品介绍:

一步法质粒DNA小提

一步法质粒DNA提取试剂盒

产品及特点 

基于碱变性原理的质粒小量制备(Miniprep)是分子克隆研究中常用的方法之一,

其操作包括三种溶液处理,一般需要 30 分钟左右的时间才能得到可以上柱的质粒

DNA 初提液。本产品只需要一种溶液处理即可以完成细菌裂解,并且裂解物可以直接上柱纯化质粒 DNA,比碱变性法快捷约 20 分钟。本产品的主要特点是:

1. 一步式,提取一个样品只需 5 分钟左右,比传统的碱变性方法快捷。

2. 适用于高拷贝、中拷贝和低拷贝质粒的提取。适用于各种 E.coli 宿主菌。

3. 质粒 DNA 产量跟经典碱变性法相当,一般 1-5mL 可以得到 3-15ug(对低拷贝

质粒)和 5-35ug(对高拷贝质粒)。

4. 所得质粒 DNA 呈超螺旋结构的比例比碱变性法更高。

5. 基因组 DNA 污染少。但由于操作太快,溶液中的 RNase 来不及降解 RNA,一

般会有少量 RNA 污染,但不影响后续实验。

6. 可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆、测序等后续实验。

 

自备试剂 无

使用方法 1、 用塑料离心管收集 0.5-5 mL 过夜培养的饱和新鲜菌液,室温 14000g 离心半分

钟,弃上清(培养基)。也可以使用-20℃冻存的细菌沉淀和 4℃放置过夜的饱和

细菌培养液,但质粒回收效率稍低。如果是中拷贝和高拷贝质粒,使用 1.5mL 菌

液即可,如果是低拷贝质粒,使用 3-5mL 菌液。常见质粒拷贝数请参考附表。

2、 在细菌沉淀中加入 700uL 溶液 A,充分吹打或涡旋振荡半分钟。

3、 将裂解液全部转移到离心吸附柱中,直接离心。如果静置 3-5 分钟后再离心,会

提高质粒产量 10%左右。

4、 室温 14000g 离心 1 分钟,弃穿透液。如果使用 3-5mL 起始菌液,则此步的离

心时间可以延长 1 分钟以确保所有液体成功过柱,吸附柱中没有残留液体。

5、 在离心吸附柱中加入 700uL 的通用洗柱液,室温 14000g 离心半分钟,弃穿透液。

6、 室温 14000g 离心半分钟,甩尽残留液体。注意:此步不能省略。

7、 将离心柱置于一个自备的 1.5 mL 塑料离心管中,在离心柱中加入 30-50uL DNA

洗脱液 2.0(对低拷贝质粒建议用 30uL 洗脱,对高拷贝质粒建议用 50uL 洗脱)。

8、 室温 14000g 离心半分钟,离心管底溶液即质粒 DNA,可以直接用于后续实验(浓

度测定、酶切、电泳和测序)或放冰箱长期保存。

注意:本方法提取的质粒 DNA 有如下特点:

1、因为没有使用剧烈的碱变性步骤,所以质粒呈现天然的超螺旋结构的比例较大。

2、由于整个操作非常快速,又没有使用碱来降解 RNA,所以试剂中的 RNase 都来

不及把细菌的内源 RNA 彻底降解,故所得质粒比碱变性法提取的质粒有更多的

RNA 污染,因此不建议使用测 OD 的方法确定质粒 DNA 的浓度,采用电

泳比较法,即通过比较质粒 DNA 跟浓度已知的 DNA marker 的相对亮度来确定

质粒的浓度。注意:RNA 污染一般不影响电泳、酶切和测序。

3、如果需要进一步去除 RNA 污染,可以在第 5 步后再增加一步洗柱操作,即在离心

吸附柱中加入 300uL 的通用洗柱液,室温 14000g 离心半分钟,弃穿透液,再进

入下一步。

4、 一般 1-5mL 菌液可以得到 3-15ug(对低拷贝质粒)或 5-35ug(对高拷贝质粒)

质粒 DNA。如果需要进一步提高质粒 DNA 产量,可以再加 30-50uL DNA 洗脱

液 2.0 到离心吸附柱中再次洗脱,可以得到相当于次洗脱量 10-20%的质粒

DNA。也可以将洗脱得到的质粒 DNA 溶液再加到离心吸附柱中洗脱,可

以使质粒 DNA 产量提高 10-20%。

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