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一步法大提质粒DNA提取试剂盒

一步法大提质粒DNA提取试剂盒

简要描述:

一步法大提质粒DNA提取试剂盒


英文名称:One-Step Max Plasmind DNAouT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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一步法大提质粒DNA提取试剂盒

产品介绍:

一步法质粒DNA大提

一步法大提质粒DNA提取试剂盒

产品及特点 

本产品是一步法质粒 DNA提取基础上开发的、能够快速从 100 mL 左右的 E.coli 培养液中取质粒 DNA 的产品。它只需要一种溶液即可以完成细菌裂解,并且裂解物可以直接上柱纯化质粒 DNA。它比经典的碱变性质粒制备方法更加快捷和方便。

本产品的主要特点是:

1. 快速,整个质粒 DNA 提取过程只需要不到 30 分钟,比传统的碱变性

方法快捷。

2. 超螺旋比例高,创的非碱法一步式细菌裂解技术,避免了强碱对

DNA 的损害,得到的质粒 DNA 切口更少。

3. DNA 纯度高,几乎没有基因组 DNA 和 RNA 污染,OD260/280 一

般在 1.7-1.9 之间。

4. DNA 可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。

5. 吸附量为 600 ug DNA,具体产率取决于质粒拷贝数。

6. 过程简单,重复性和稳定性好。 

 

运输及保存 常温运输及保存(溶液 A 需要 4℃保存),有效期一年。 自备试剂 无

使用方法 1. 用 50 mL 离心管分数次收集 10-60 mL 新鲜的菌液,一般可以 5000 rpm

离心 10 分钟,去除上清即得细菌沉淀。

2. 往细菌沉淀中加入 14 mL 溶液 A,充分振荡悬浮或吹打混匀。注意:充分

重悬细胞沉淀(无块状物)对于获得高的质粒产量十分重要。

3. 将裂解液全部转移到大离心吸附柱中,放入到配套的收集管中。

4. 6000 rpm 离心 5-10 分钟,弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒

DNA,而将基因组 DNA 和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离

心下去的裂解液,可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。

5. 将 10mL 通用预洗液加入到离心吸附柱中,室温静置 2 分钟后 6000 rpm

离心 5 分钟,弃穿透液。

6. 重复上步一次。

7. 将 10mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中,室温静置 2 分钟后 6000 rpm

离心 5 分钟,弃穿透液。

8. 重复上步一次。

9. 室温 6000 rpm 空甩 5 分钟,弃穿透液。注意:此步很重要,不能跳过。

10.将离心吸附柱放入一个自备的、干净的 50 mL 塑料离心管中,加 1 mL 通

用洗脱液(洗脱液如加热到 50-65℃效果更佳),室温静置 2 分钟后 6000

rpm 离心 5 分钟,收集液即是质粒 DNA 溶液。

11.重复上步 1 次以便洗脱更多的质粒 DNA。

12.合并所得质粒 DNA,立即使用或-20℃储存。 注意事项

1. 细菌培养时间一般为 12-16 小时,但接种量大时应减少时间。过度培养

会降低质粒的质量甚至导致质粒 DNA 突变。

2. 菌体过多会造成裂解液粘稠透,需要充分吹打,否则容易堵塞离心柱。

3. 通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次,否则残留通用洗柱液中的乙醇会

干扰后续实验。

4. 质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相

关。一般 1.5 mL 过夜培养菌体可收获约 10 ug 高拷贝质粒。

5. 从生长旺盛的细菌中纯化的质粒在电泳中表现为 2-3 条带有时甚至为

4-6 条带均属正常,它们就是还未来得及分开的相套的质粒,易被误判为

基因组 DNA。

 

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