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柱式质粒DNA提取试剂盒

柱式质粒DNA提取试剂盒

简要描述:

柱式质粒DNA提取试剂盒


英文名称:Column Plasmid DNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式质粒DNA提取试剂盒

产品介绍:

碱变性法质粒DNA小提

柱式质粒DNA提取试剂盒

产品及特点 

本试剂盒是用于质粒 DNA 小量制备与纯化的试剂盒。本产品基于改良后的碱变性法,首先菌体经碱裂解法处理使基因组 DNA 和质粒 DNA 均变性,再用酸中和,质粒 DNA 客户快速复性,而基因组 DNA 不能快速复性,故可以通过离心去除,除去

后含质粒的上清用离心吸附柱吸附质粒 DNA,洗去杂质,即可得到纯化的质粒 DNA。

本产品具有下列特点:

1. 快速、步骤少,整个操作在 30 分钟左右完成。

2. 不需要预平衡离心吸附柱。

3. 通用洗柱液即开即用,不需要用户额外加乙醇。

4. 溶液 B 中有蓝色染料,便于目测非常关键的碱变性和中和反应两步的溶液混匀状

况,保证实验效果。

5. 产量高,一次可以处理 1-4 mL 过夜培养的菌液,每毫升过夜培养的细菌可以提

取到 2-5 ug/mL(取决于质粒是高拷贝、中拷贝还是低拷贝)。

6. 纯度高,采用本试剂盒提取的质粒 OD 比值在 1.8-2.0 之间,可以直接用于酶切、

转化、测序及 PCR 等。

 

运输及保存 常温运输和保存,RNase A 溶液需要-20℃保存,有效期一年。

自备试剂 无

使用方法 1. 从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中,37℃震荡培养 12-16 小时(摇

床转速 200-300)。注意:建议使用 LB 培养基,营养更丰富的培养基会使菌体

浓度过高,超过纯化系统处理能力而降低 DNA 质量。另外,延长培养时间会因

细胞死亡、裂解而造成质粒 DNA 浓度降低。

2. 用 1.5 mL 离心管收集 1-4 mL 过夜培养饱和菌液,室温 12,000 rpm 离心 1

分钟,弃上清,再短暂离心,吸弃残留液体。

3. 使用本试剂盒时,先将全部 RNase A 溶液全部加入到柱式质粒 DNAout

溶液 A(简称溶液 A,下同)中,摇匀后再取用,未用完的溶液 A 放 4℃保存。

4. 加入 250 uL 溶液 A,用枪头充分吹打使菌体重悬。注意:细胞未充分悬浮会影

响后续碱变性,可以使用漩涡振荡器混匀或使用枪头吸头吹打沉淀至完全混匀。

5. 加入 250 uL 柱式质粒 DNAout 溶液 B(下面简称溶液 B,如果溶液 B 在低温

放置产生沉淀,须 37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀看

到溶液的蓝色变得均匀并且溶液变粘即可(一般需要颠倒 4-6 次),然后冰上放

置不超过 5 分钟。注意:冰上放置不要超过 5 分钟,否则质粒 DNA 会有碱损伤。

千万不要剧烈振荡,否则基因组 DNA 断裂产生的片段非常容易污染质粒 DNA。

溶液 B 用后需要将盖拧紧存放,否则空气中的二氧化碳会进入溶液,形成碳酸,

中和溶液 B 中的碱,降低其效率。如果溶液 B 颜色不是蓝色,则表示变质,应

该弃之不用并且速跟厂家联系。

6. 加入 350 uL 冰上预冷的柱式质粒 DNA溶液 C(下面简称溶液 C),温和反

复颠倒直到溶液颜色变成无色(一般需要颠倒混匀 4-6 次)。混匀后可见白色沉

淀物产生,然后冰上放置至少 5 分钟让质粒 DNA 复性。

7. 12,000 rpm 离心 3 分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液

比重较大,部分沉淀物悬浮在上清液中属正常,吸取上清时避开漂浮的沉淀物即

可。如果此步的离心在 4℃进行,可减轻沉淀物漂浮。

8. 静置 2 分钟以让质粒 DNA 与离心吸附柱充分结合,保证静置不少于 2 分钟十分

重要。

9. 室温 12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管中的废液。

10. 加入 500 uL 的通用洗柱液到离心吸附柱中,室温 12,000 rpm 离心 1 分钟,

弃收集管中废液。注意:通用洗柱液中含乙醇,每次用后需要将盖拧紧存放,否

则乙醇会挥发。

11. 重复上步 1 次。

12. 室温 12,000 rpm 离心 1 分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇

会影响 DNA 的后续使用(如残留乙醇使 DNA 溶液在电泳上样时不能沉淀到加

样孔中)。

13. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 mL 塑料离心管(自备)中,加入 30-100 uL

65-80℃预热的 DNA 洗脱液 2.0,室温放置 2 分钟。常温的 DNA 洗脱液 2.0

也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

14. 室温 12,000 rpm 离心 1 分钟,离心管底溶液即质粒 DNA。

15. 由于天泽基因的吸附柱结合 DNA 能力较强,如果再加适量 DNA 洗脱液 2.0 到

离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多质粒 DNA(相当于第1次洗脱的 20-30%),

但注意不要使用上步得到的 DNA 洗脱液 2.0 来洗脱。

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