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柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒

柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒

简要描述:

柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒


英文名称:Column Endo-free Plasmid DNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒

产品介绍:

碱变性法无内毒素质粒DNA小提,1次提取1-5mL菌液

柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒

产品及特点 

本产品是整合柱式质粒 DNA提取试剂盒 和菌体内毒素清除剂两产品而

成。菌体内毒素清除剂在质粒提取前就把细胞壁上的内毒素清除掉,彻底避免了目前通用的先提取 DNA+内毒素混合物,再从中纯化质粒 DNA 的弊端。用本产品提取的质粒 DNA,内毒素的污染浓度低,适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。

1. 操作简单,只在经典的柱式质粒 DNA 提取前,增加菌体内毒素清除一步。

2. 去内毒素效果好,处理一次可以去除 99%以上的内毒素。

3. 质粒丢失少,产率只比柱式质粒 DNAout 低 5-10%,效果好于先提质粒

DNA,再用液相内毒素清除剂处理的方法。

4. DNA 可以直接用于转染等实验。

 

运输及保存 常温运输及保存,有效期一年。RNase A(10mg/mL)收到样品后需要低

温保存。

自备试剂 菌液

使用方法 一: 用菌体内毒素清除剂清除 E.coli 细胞壁上的内毒素。

1. 收集 1.5-5 mL E.coli 饱和菌液,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃上清,

得到细菌沉淀。

2. 加入 1 mL 菌体内毒素清除剂温和混匀后 10,000-12,000 rpm 离心 1

分钟,弃上清(含内毒素)。

3. 一次洗涤(1-2 步)可以去掉 90%以上的内毒素,如果需要,可以再重

复上述洗涤操作步骤 3 次,得到的菌体可以直接进入后续的质粒 DNA

提取步骤。

二:从无内毒素的 E.coli 中提取质粒 DNA

4. 先将全部 RNase A 溶液全部加入到柱式质粒 DNAout 溶液 A 中,摇匀

后再取用,未用完的柱式质粒 DNAout 溶液 A 在 4℃保存。

5. 在第 3 步所得菌液中加入 250 uL 柱式质粒 DNAout 溶液 A,用枪头充

分吹打使菌体重悬(此步在冰上操作效果更佳)。注意:细胞未充分悬浮

会影响后续操作,可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用 Tip 吸头吹打沉

淀至完全混匀。

6. 加入 250 uL 柱式质粒 DNAout 溶液 B(如果溶液 B 有沉淀,用前须

37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀 4-6 次,看

到溶液变粘即可,然后冰上放置不超过 4-5 分钟。注意:此步处理不能

超过 5 分钟,否则 DNA 的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡,

否则基因组 DNA 断裂产生的片段非常容易污染质粒 DNA。溶液 B 用后

需要将盖拧紧存放,否则空气中的二氧化碳会进入溶液,形成碳酸,中

和溶液 B 中的 NaOH,降低其效率)。

7. 加入 350 uL 冰上预冷的柱式质粒 DNAout 溶液 C,反复颠倒混匀 4-6

次,可见白色沉淀物产生,然后冰上放置至少 5 分钟。

8. 高转速(12,000 rpm 以上)4℃离心 5 分钟,小心将上清液转移到离

心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现

象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行,更容

易出现沉淀物漂浮的现象。

9. 静置 2 分钟以让质粒 DNA 与吸附柱充分结合,此步十分重要。

10. 室温 12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管中的废液。

11. 加入 500 uL 的通用洗柱液,室温 12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管

中废液。注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙

醇会挥发。

12. 重复上步 1 次。

13. 室温 12,000 rpm 离心 1 分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残

留乙醇会影响 DNA 的后续使用(如 DNA 上样时不能沉淀到加样孔中)。

14. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 mL 塑料离心管(自备)中,加入 30-100

uL 65-80℃预热的 DNA 洗脱液 2.0,室温放置 2 分钟。常温的 DNA

洗脱液 2.0 也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

15. 室温 12,000 rpm 离心 1 分钟,离心管底溶液即质粒 DNA。

1. 由于天泽基因的吸附柱结合 DNA 能力较强,如果再加适量 DNA 洗脱液

2.0 到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多质粒 DNA(相当于一次洗

脱的 20-30%),但注意不要使用上步得到的 DNA 洗脱液 2.0 来洗脱

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