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大提柱式质粒DNA提取试剂盒

大提柱式质粒DNA提取试剂盒

简要描述:

大提柱式质粒DNA提取试剂盒


英文名称:Column Max Plasmid DNAouT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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大提柱式质粒DNA提取试剂盒

产品介绍:

碱变性法质粒DNA大提

大提柱式质粒DNA提取试剂盒

产品及特点 

本试剂盒是用于质粒 DNA 大量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处

理,再通过离心吸附柱,专一结合 DNA,洗去杂质,高效快速提取质粒

DNA,全套操作可以在 30 分钟之内完成。使用本试剂盒可从 50-100 mL 过

夜培养的菌液纯化得到高达300-500 ug的高纯度质粒DNA(OD260/OD280

= 1.8-2.0),可以直接用于酶切、转化、测序及 PCR 等。

1.快速、步骤少,整个操作在半个小时之内完成。

2.纯度高,采用本试剂盒提取的质粒 OD 比值在 1.8-2.0 之间。

3.产量高,每毫升过夜培养的细菌可以提取到 2-5 ug/mL。

4.用途广,适用于低拷贝和高拷贝质粒。

 

 

自备试剂 无。

使用方法 1. 用 250 mL 离心管收集 100-300 mL 菌液,5000 rpm 离心 10 分钟,去

除上清。

2. 往细菌沉淀中加入 5 mL 柱式质粒 DNAout 溶液 A,充分振荡悬浮(

使用时需要将 RNase A 溶液全部加入到溶液 A 中并混合均匀,未用完的、

含 RNase A 的溶液 A 需放 4℃保存)。注意:充分重悬细胞沉淀使之无细

胞结块状物对于获得高的质粒产量十分重要。

3. 加入 5 mL 柱式质粒 DNAout 溶液 B,温和翻转 10 余次至蓝色变得均匀。

室温放置 5-10 分钟裂解细菌。注意: 避免剧烈振荡,否则细菌基因组 DNA

将断裂为小片段,与质粒难以分离,污染质粒 DNA。溶液 B 用后需要将盖

拧紧存放,否则空气中的二氧化碳会进入溶液,形成碳酸,中和溶液 B 中

的碱,降低其效率。如果溶液 B 颜色不是蓝色,则表示变质,应该弃之不

用并且速跟厂家联系。

4. 加入冰浴的 7mL 柱式质粒 DNAout 溶液 C,颠倒混匀,此时混合液应该

从蓝色变成无色,如果不发生颜色变化,则表示柱式质粒 DNAout 溶液 C

变质,需要联系厂家。将混合液冰上放置 10 分钟,将有白色絮状物形成。

注意不要过分振荡。

5. 6000 rpm 离心 10 分钟。如果离心管承受能力强,离心速度还可以适当提

高以充分沉淀絮状物。

6. 将上清液(约 20 mL)转移到离心吸附柱中,放入 50 mL 套管中。由于

此时的溶液比重较大,部分沉淀物悬浮在上清液中属正常,吸取上清时避

开漂浮的沉淀物即可。

7. 6000 rpm 离心 5 分钟,质粒 DNA 将与离心吸附柱中的膜结合。弃穿透

液。

8. 将 10 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中,室温静置 2 分钟后 6000 rpm

离心 5 分钟,弃穿透液。

9. 重复上步一次,即将 10 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中,室温静置 2

分钟后 6000 rpm 离心 5 分钟,弃穿透液。

10.室温 6000 rpm 空甩 5 分钟,弃穿透液。注意:此步对去除残留通用洗柱

液很重要,否则通用洗柱液会影响 DNA 的使用。

11.将离心吸附柱放入一个自备的、干净的 50 mL 塑料离心管中,加 0.5 mL

DNA 洗脱液 2.0(洗脱液如加热到 50-65℃效果更佳),室温静置 2 分钟

后 6000rpm 离心 5 分钟,收集液即是质粒 DNA 溶液。

12.本试剂盒中的离心吸附柱吸附能力较强,所以再用 1 mL DNA 洗脱液 2.0

洗脱 3-4 次才能把绝大部分质粒 DNA 洗脱下来。得到的 RNA 可以收集在

一起立即使用或存放于-80℃待用。注:如果 DNA 洗脱液不够,可以用自

备的 DEPC 水代替。注:一般情况下,第1次洗脱可以洗脱约 25%的质粒

DNA;第二次洗脱可以洗脱约 35%的质粒 DNA;第三次洗脱可以洗脱约

20%的质粒 DNA;第四次洗脱可以洗脱约 10%的质粒 DNA;第五次洗脱

可以洗脱约 8%的质粒 DNA。

13.合并所得质粒 DNA,立即使用或-20℃储存。如果需要使用液相内毒素清

除剂清除质粒 DNA 中的内毒素,可以直接将此步所得的 DNA 溶液用于去

内毒素处理。如果 DNA 浓度太低,可以另购本公司的核酸浓缩剂进行浓缩。

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