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柱式细菌DNA提取试剂盒

柱式细菌DNA提取试剂盒

简要描述:

柱式细菌DNA提取试剂盒


英文名称:Column Bacterial DNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式细菌DNA提取试剂盒

产品介绍:

柱式法提取革兰氏阴性和阳性细菌的DNA

柱式细菌DNA提取试剂盒

产品及特点 

本产品是在细菌 DNA提取 基础上开发的柱式升级产品,可以

用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组 DNA 的快速提取。

1. 操作简单,整个过程不到 20 分钟。

2. 产率一般在 5-20 ug/mL 过液培养的饱和菌液(10

8-10

9个细胞)。

3. OD260/280 一般在 1.8 以上,可直接用于 PCR、酶切、杂交等实验。

4. DNA 段长度一般在 40-50 Kb 左右。

5. 每次提取可以处理 0.1-1.5 mL 的细菌,也可以使用菌落。

6. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。

7. 安全无毒,本试剂盒对人体无害,无腐蚀性和刺激性气味。 

 

运输及保存 常温运输及保存(溶菌酶干粉需要 4℃或-20℃保存),有效期一年。 自备试剂 仿、自备无菌水。 使用方法 注意:溶液 A 和溶液 B 容易产生沉淀,溶液 B 十分粘稠,均需要放置在 65℃预热

使沉淀溶解、粘稠度降低,用前充分摇匀。

一: 对革氏阴性细菌样品, 不需用溶菌酶

1. 将 0.1-1.5 mL 过夜培养的菌液转移到 1.5 mL 塑料离心管中, 12,000 rpm

室温离心 1 分钟沉淀细菌,弃上清。

2. 加入 300 uL 预热的溶液 A 到细菌沉淀中,充分吹打均匀。

3. 再加入 150 uL 预热的溶液 B 到离心管中,颠倒数次混匀。此时溶液中可能

有白色丝状悬浮物产生。由于溶液 B 比较粘稠,可以采取称量方法取用,150

uL 约等于 150-160 mg。也可以将 1 mL 枪头剪去一截再吸取。

4. 65℃放置 3-5 分钟。如果室温放置,DNA 产量会降低 10-20%。

5. 加入 200 uL 自备绿仿,震荡混匀 10-30 秒,此时溶液将呈乳白色。

6. 12,000 rpm 室温离心 2 分钟。此时上清液将变得透明,中间层有白膜。小心

转移上清液到一个新的 1.5 mL 塑料离心管中,避免触及中间层的白膜。

7. 加入 1.5 倍体积(约 0. 7 mL)的溶液 C,颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中,

室温放置至少 2 分钟。

8. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,DNA 将吸附在离心吸附柱的膜上,倒弃收集

管中的穿透液。

9. 将 0.5 mL 通用洗柱液加入离心柱中,12,000 rpm 室温离心 1 分钟,弃穿透

液。

10. 重复上步操作一次。

11. 空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的 1.5 mL 离心管中。

12. 加 50-100 uL 通用洗脱液,室温放置 3-5 分钟。

13. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟即得 DNA 溶液。

14. 由于本产品使用的离心吸附柱吸附 DNA 的能力较强,可以重复上步操作一次

以便得到更多的 DNA。

15. 直接取 5-10 uL 电泳检测 DNA,其余放冰箱备用。

二: 对革氏阳性细菌样品,需用溶菌酶

1. 将 0.1-1.5 mL 过夜培养的革氏阳性细菌 12,000 rpm 室温离心 1 分钟后, 重

悬于 0.6 mL 溶菌液中(溶菌液配制:30 mL 无菌水+600 mg 溶菌酶,配制后

分装成小管并放-20℃长期保存,每次只用一小管),颠倒混匀 5-10 次后

放 37℃保温至少 30 分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间,需要自己根据

不同的细菌摸索)。

2. 12,000 rpm 室温离心 10 分钟,小心弃上清。

3. 后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第 2 步。

三: 其他注意事项

1. 可以直接使用细菌菌落提取 DNA,操作时直接将细菌菌落挑入到溶液 A 中,

后续操作同上。

2. 从单个菌落中提取到的 DNA 较少,所以只用 30 uL 通用洗脱液洗脱

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