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柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒

柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒

简要描述:

柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒


英文名称:Column Myco DNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒

产品介绍:

柱式法提取分枝杆菌中的微生物DNA

柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒

产品及特点 

分枝杆菌属(Mycobacterium)是极为古老的细菌,与人类的疾病相关的就

有 25 种以上,包括引起结核病的结核分枝杆菌(Mycobacteria tuberculosis)。

近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现,分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR

快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法,但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的

细胞壁,快速提取其基因组 DNA 一直是十分棘手的技术问题。本产品就是为解决

这一问题而开发,具有下列特点:

1. 操作简单,客户不需要准备额外的试剂。

2. PCR 检测灵敏度一般在 10-100 CFU/mL 样品。

3. 既可以使用培养的细菌,也可以使用痰液、精液、血液、脑脊液等样品。

4. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。

5. 安全无毒,本试剂盒对人体无害,无腐蚀性和刺激性气味。

6. 本产品只能用于科研。

自备试剂 TE 缓冲液,绿仿。

使用方法 注意:文献报道部分分枝杆菌在 DNA 提取过程中还有形成菌落的能力,所以任何

丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待,并严格按有关要求进行消毒处理。

一: 培养的分枝杆菌样品的预处理

1. 刮取培养的分枝杆菌到 0.5 mL 自备 TE 缓冲液中。

2. 80℃放置 20 分钟以杀灭细菌。

3. 3000 g 室温离心 15 分钟,弃上清。

4. 将细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组 DNA 提取步骤。

二: 含分枝杆菌的痰液样品的预处理

1. 将痰液样品(0.5mL-2mL)加入到干净的 10 mL 或 15 mL 塑料离心管中。

2. 加 2mL 的自备蒸馏水,在加入 100mg 化痰液干粉,充分混合均匀后室温放

置 15-30 分钟。如果痰很浓,可以延长保温时间。

3. 3000 g 室温离心 15 分钟,弃上清。

4. 将细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组 DNA 提取步骤。

三: 含分枝杆菌的血液样品的预处理

1. 用自备红细胞裂解液对血液进行红细胞裂解处理

2. 将得到的白细胞沉淀放-20℃或更低温度放置 10 分钟。

3. 迅速将得到的白细胞沉淀 100℃加热 10 分钟。

4. 上述处理将使大部分白细胞破裂,加入自备的 TE 到离心管体积的一半位置。

此步使白细胞的 DNA 进入缓冲液中。

5. 离心 5-10 分钟沉淀细菌,离心速度取决于离心管的大小。如果样品在 1.5 mL

离心管,则可以 12000-15000 g 室温离心。如果样品在 10-15 mL 离心管,

则 3000-5000 g 室温离心。

6. 吸弃上清(含白细胞 DNA),将所得细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌

基因组 DNA 提取步骤。

四: 分枝杆菌菌基因组 DNA 的提取

1. 将 150 uL 65℃预热过的柱式分枝杆菌 DNA 提取溶液 A 加到有分枝杆菌沉淀

的螺旋盖离心管中,充分震荡混匀。

2. 将细菌和溶液 A 的混合物转移到一个干净的 1.5 mL 塑料螺旋盖离心管中。强

烈建议不要使用压盖式塑料离心管,否则后面处理过程溶液容易漏出。

3. 加入 300 uL 柱式分枝杆菌 DNA 提取溶液 B 和 300 uL 自备绿仿,充分震荡

混匀。

4. -20℃放置直到液体凝固,一般需要 20-60 分钟。过夜放置也可。也可以-20℃

放置 5 分钟直到液体凝固。

5. 放室温融化后振荡半分钟。

6. 12000-15000 g 室温离心 3-5 分钟。

7. 小心转移全部上清到一个新离心管中,加入等体积的柱式分枝杆菌 DNA 提取

溶液 C,颠倒混匀。

8. 将液体转移到离心吸附柱中,室温放置 2 分钟。

9. 12000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液。

10. 加入 0.5 mL 通用洗柱液 12000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液。

11. 重复上步的洗涤过程一次。

12. 短暂离心半分钟。此步不要省略,否则残留的洗柱液(含乙醇)将会影响 DNA

电泳、酶切和 PCR 等反应。

13. 将离心吸附柱转移到一新的离心管中,加入 30-100uL DNA 洗脱液 2.0,

12000-15000 g 室温离心半分钟,所得溶液即基因组 DNA。

14. 直接取 5-10 uL 电泳检测 DNA,其余放冰箱备用或用于后续反应。

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