欢迎光临上海钦诚生物科技有限公司
主页 > 产品中心 > > DNA提取纯化 > QC120406-15柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒
产品中心
柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒

柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒

简要描述:

柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒


英文名称:Column Plant Chloroplast DNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

打印当前页

分享到:

柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒

产品介绍:

提取植物叶绿体的DNA

柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒

产品及特点 

本试剂盒是结合植物叶绿体纯化试剂盒和柱式植物 DNA 抽提试剂盒而推出

的新兴产品,专门用于植物叶绿体 DNA 的快速提取。它具有下列特点:

1. 纯度高,不含污染和抑制剂,可以直接用于酶切、PCR、real-time PCR、

multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting, microsatellite

analysis 等各种后续分子生物学实验,不会发生离心柱堵塞现象。

2. 产率一般在 1-2 ug/1 g 叶片样品。OD260/280 一般在 1.8 以上。DNA 片

段长度一般在 40-50 Kb 左右。

3. 本产品足够 15 次提取,每次可处理 30g 叶片。

4. 已经成功用于菠菜,大豆,莴笋,白菜,烟草和甜菜等双子叶植物,也适用

于单子叶等其他植物(可能需要优化条件)。

 

运输及保存 常温运输和保存(但匀浆液成分二长期保存时需要放 4℃), 保存期限一年。

自备物品 去离子水、绿仿、Waring 匀浆机、烧杯、量筒

使用方法 注意:叶绿体对温度高度敏感,所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行,所用

器皿和溶液均需要在 4℃预冷。离心时一定要在 4℃进行,离心力以 g 而不是 rpm

计算。如果需要研究叶绿体的功能,提取还需要在昏暗的光线条件下进行。强烈

建议用显微镜监控整个过程中叶绿体的回收情况。

一:叶绿体的纯化

1. 实验前 1-2 天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成,否则离

心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净,再用

蒸馏水淋洗,去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理,则保存时需要

保持叶片湿润,即使如此,叶片的放置时间也不能超过一天。

2. 计算实验所需叶绿体匀浆液的体积(下面简称匀浆液),本试剂盒一次实验可

处理 30 g 叶片,对一般植物,每克叶片需要准备 4 mL 匀浆液,则一次实

验需要准备 120mL 匀浆液。对烟草和大豆,每克叶片需要 6 mL 匀浆液,

则一次实验需要准备 180mL 匀浆液。为了保险可以多配 10%。

3. 实验当天制备匀浆液。制备方法是:将自备的去离子水与试剂盒提供的匀浆

液成分一在干净的玻璃或塑料容器中按 4:1 的比例混合,然后在每 100 mL

混合液中加入匀浆液成分二干粉 0.1g(终浓度为 0.1%),轻柔搅拌 10 分钟

后,所得溶液即为匀浆液。冰上预冷待用。匀浆液只能当天使用,不能放置。

4. 预留 1.5mL 用于悬浮叶绿体,其余匀浆液转移到 Waring 匀浆机(即家用

制备果汁的匀浆机)中,再快速将新鲜植物叶片的叶脉去除,再将叶片剪成

1-3 cm2大小的碎片,浸泡在匀浆机里面的匀浆液中。

5. 低速匀浆 10 秒,避免起泡沫。用玻璃棒把液面的叶碎片按入到匀浆机底部,

再低速匀浆 10 秒。注意:还可用 Dounce 玻璃匀浆器,Polytron 匀浆机和

研磨(加玻璃珠)等匀浆,但它们单次处理量小,需分成很多份处理后再汇

集,非常不方便。

6. 用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液,用预冷的 200 mL 量筒收集穿透液,再等分到

4 个预冷的 50 mL 的塑料离心管中(每个管中的穿透液不要超过 35 mL)。

带柄尼龙滤膜洗涤干净后可反复使用。

7. 在水平转子离心机上 4℃ 200 g 离心 3 分钟(对菠菜,白菜和莴笋材料)或

400 g 离心 1 分钟(对甜菜材料),白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。其

他植物材料则需要用户自己摸索离心力。

8. 将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的 50 mL 塑料离心管中。

9. 在水平转子离心机上 4℃ 1000 g 离心 7 分钟,小心弃上清,沉淀含叶绿体。

10. 在沉淀中加入 1.5 mL 预冷的匀浆液,手弹离心管底部使叶绿体重悬。注意:

重悬时避免溶液起泡,也不要用枪头吹打,否则叶绿体容易破裂。沉淀

下有白色淀粉属于正常现象,但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。

11. 将 4 管叶绿体重悬液汇集(共约 6 mL),得到叶绿体粗提液。

12. 如果对叶绿体 DNA 是否含细胞核 DNA 的要求不高,则叶绿体粗提液可以直

接用于叶绿体 DNA 纯化,具体操作是在水平转子离心机上 4℃ 1000 g 离

心 7 分钟,小心弃上清,沉淀为叶绿体,直接用于 DNA 纯化(见步骤二)。

13. 如果需要无细胞核 DNA 污染的叶绿体 DNA,则按以下流程操作:在 50 mL

塑料离心管中先加入 6 mL 匀浆液成分一和 4 mL 的 Percoll,充分混合均匀

得到 40%的 Percoll 溶液,在其液面上小心铺上 6mL 的叶绿体粗提液,在

水平转子离心机上 4℃ 1700 g 离心 6 分钟,管底绿色沉淀为完整的叶绿体,

液面的绿色部分为破碎的叶绿体。小心将上清去除后,直接将沉淀(完整叶

绿体)用于叶绿体 DNA 纯化(见步骤二)。

二:叶绿体 DNA 的纯化(溶液 A 和溶液 B 容易产生沉淀,溶液 B 十分粘稠,均

需 65℃溶解并摇匀后待用)

14. 将 600 uL 预热的溶液 A 加入到叶绿体沉淀中后充分吹打混匀。

15. 加入 300 uL 预热的溶液 B,震荡混匀 10-30 秒。注意:溶液 B 非常粘稠,

可以采取称量方法称取 300mg(约等于 300uL)使用或将 1 mL 枪头剪去

一截后再吸取 300uL 使用。

16. 65℃放置 3-5 分钟。如果室温放置,DNA 产量会降低 10-20%。

17. 加入 200 uL 自备绿仿,震荡混匀 10-30 秒。

18. 12,000 rpm 室温离心 2 分钟。此时上清液将变得透明,中间层有白膜。小

心转移上清液(约 0.8 mL)到一个新的 3-5 mL 离心管中,避免触及中间

层的白膜,可留少量上清不取。

19. 加入 1.5 倍体积(约 1.2 mL)的溶液 C,颠倒混匀后先转移 0.7 mL 到离心吸

附柱中,室温放置至少 2 分钟。12,000 rpm 室温离心 1 分钟,DNA 将吸

附在离心吸附柱的膜上,倒弃收集管中的穿透液。

20. 再将剩余的溶液按上步方法上柱。

21. 将 0.5 mL 通用洗柱液加入到吸附柱中,12,000 rpm 室温离心 1 分钟,弃

穿透液。重复操作一次。空甩半分钟去除残留液体。

22. 将离心吸附柱放置在一新的 1.5 mL 塑料离心管中,加 50-100 uL DNA 洗

脱液 2.0,室温放置 3-5 分钟。

23. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟即得植物叶绿体 DNA 溶液,直接取 5-10 uL

电泳检测,其余放冰箱备用。

 

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
  • ©2021上海钦诚生物科技有限公司版权所有 技术支持:化工仪器网
  • QQ号码:597467067 邮 箱:shqcsw01@163.com 地 址:上海市宝山区长江西路2351号2楼8室-8 备案号:沪ICP备19009120号-2 总访问量:29582
在线客服 联系方式

服务热线

18121034793