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柱式动物线粒体DNA提取试剂盒

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒

简要描述:

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒

英文名称:Column Animal mtDNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式动物线粒体DNA提取试剂盒

产品介绍:

柱式法提取动物线粒体DNA,用于PCR检测

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒产品及特点 

线粒体 DNA(mtDNA)是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料,

但传统的两步式 mtDNA 提取方法是先温和裂解细胞,分离线粒体,然后再从

线粒体中提取 mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制,需要

针对不同组织材料单独进行优化。本方法克服了上述缺点,具有下列优点:

1. 不需要单独纯化线粒体,柱式法纯化,操作简单快捷。

2. 得到的 mtDNA 可以直接用于 PCR。

3. 每 107个动物细胞一般能得到 100ng 左右的 mtDNA,每克组织一般能得

到 3-5 ug mtDNA。

4. 注意:本产品只适合于动物材料,不适合于植物材料,因为植物线粒体 DNA

一般都十分巨大,非常难提。

 

运输及保存 常温运输,短期可以在室温放置;长期保存放 4℃。

自备试剂 无

使用方法 一:培养细胞预处理

1. 用自备的 0.25%胰酶消化液处理约 107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用 PBS 或 TBS 等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于

mtDNA 提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将 1g 新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小),转移到 1.5mL 塑料

离心管中,用于 mtDNA 提取。注意:不要使用冻存的动物组织,因

为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其 DNA 释放出来被胞浆中

的 DNA 酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将 3-5 mL 抗凝外周血静置 30 分钟或低速离心 5 分钟,取白细胞层。

5. 用自备 PBS 洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于 mtDNA 提取。

四:mtDNA 提取

5. 在细胞沉淀或剪碎的组织中加入 250 uL 冰浴的溶液 A,充分吹打分散。

如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入 250 uL 常温的溶液 B(如果溶液 B 有沉淀,用前须 37℃加热溶解

后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀 10 次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置 6-8 分钟。注意不要超过 8 分钟。

8. 加入 350 uL 冰浴的溶液 C,温和混匀 4-6 次,可见白色沉淀物产生,然

后放冰上放置 20-25 分钟。

9. 室温 12000-15000 g 离心 10 分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。

由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避

开漂浮的沉淀即可。

10. 静置 5 分钟以让 DNA 与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11. 室温 12000-15000 g 离心 1 分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入 500 uL 的通用洗柱液,室温 12000-15000 g 离心 1 分钟,弃收集

管中废液。注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙

醇会挥发。

13. 重复上步 1 次。

14. 室温 12000-15000 g 离心 1 分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则

残留乙醇会影响 DNA 的后续使用(如 DNA 上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 mL 塑料离心管中,加入 30-50 uL

65-80℃预热的 DNA 洗脱液,室温放置 2 分钟。常温的 DNA 洗脱液也可

以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16. 室温 12000-15000 g 离心 1 分钟,离心管底溶液即 mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合 DNA 能力较强,如果再加 30-50 uL DNA 洗

脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多 mtDNA(相当于一次洗脱

的 20-30%),但注意不要使用上步得到的 mtDNA 溶液来洗脱。

18. 12000-15000 g 离心 1 分钟,离心管底溶液即线粒体 DNA。每 107个动

物细胞一般能得到 100ng 左右的 mtDNA,每克组织一般能得到 3-5 ug

mtDNA。如果 DNA 需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于 DNA 机械断裂,电泳时 DNA 可能不呈现专一的带,但此 mtDNA 溶

液可以直接用于 PCR

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