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柱式海洋动物DNA提取试剂盒

柱式海洋动物DNA提取试剂盒

简要描述:

柱式海洋动物DNA提取试剂盒


英文名称:Column Marine Animal DNAout

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式海洋动物DNA提取试剂盒

产品介绍:

提取海洋动物的总DNA

柱式海洋动物DNA提取试剂盒产品及特点 

本产品是在柱式动物 DNA提取试剂盒基础上优化改良而得,专门针对海洋动物的基因组 DNA 提取的试剂盒,可用于鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物和水产动物的荃因组 DNA 提取,可以有效去除海洋动物组织中的蛋白、脂肪及其他有机化合物等杂质。本产品主要特点是:

1. 使用本试剂盒提取的基因组 DNA 可适用于各种常规分子生物学操作,如:

酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等试验。

2. 操作简单安全,1 小时内即可获得超纯的基因组 DNA,纯化过程中不需

要使用苯酚绿仿等有机试剂。

3. 应用广泛,适用于多种动物细胞和动物组织等。

4. 性价比高,质量和国外同类试剂盒相当,价格更低。

 

运输及保存 常温运输和保存,但蛋白酶 K 溶液(20 mg/mL)需要低温运输,-20℃保存,

有效期一年。

自备试剂 无水乙醇、RNase A 溶液(100mg/mL)

使用方法 注意:使用前请先在柱式海洋动物 DNAout 溶液 C 中加入 17mL 自备的无水

乙醇,在专用洗柱液中加入 60mL 的自备无水乙醇。

1. 切取不多于 30 mg 的海洋动物组织材料,放入装有 200 μL 柱式海洋动

物 DNAout 溶液 A 的离心管中,涡旋振荡 15 秒。注意:根据提取的组

织不同,起始量也稍有不同,腮的细胞量较大,一般建议提取量不超过

20 mg。如果需要去除 RNA,可加入 40 μL RNase A(10 mg/mL)

溶液(客户自备,本公司该产品的编号是 CAT#:3160),振荡 15 秒,

室温放置 5 分钟。

2. 加入 20μL 蛋白酶 K 溶液(20 mg/mL),涡旋混匀,简短离心以去除管盖

内壁的水珠。在 56℃下放置,直至海洋动物组织完全溶解,简短离心以

去除管盖内壁的水珠,再进行下一步骤。注意:不同动物组织裂解时间不

同,通常需 0.5-2 小时即可完成。扇贝组织 0.5 小时基本可裂解完全,

虾和鱼类组织 1 小时。每小时振荡混合样品 2-3 次,每次振荡混匀 15

秒。

3. 加入 200μL 柱式海洋动物 DNAout 溶液 B,充分颠倒混匀,70℃放置

10 分钟,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意:加入

柱式海洋动物 DNAout 溶液 B 时可能会产生白色沉淀,一般 70℃放置时

会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可

能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不纯。

4. 在混合液中加入 200μL 无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状

沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。

5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个硅胶膜离心吸附柱中(吸附柱放

入收集管中),12,000 rpm(~13,400×g)离心 30 秒,倒掉废液,

将吸附柱放回收集管中。

6. 向离心吸附柱中加入 500 μL 柱式海洋动物 DNAout 溶液 C,13,000

rpm(~13,400×g)离心 30 秒,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中。

7. 向吸附柱中加入 600 μL 专用洗柱液,12,000 rpm(~13,400×g)离

心 30 秒,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中。

8. 重复上步操作一次。

9. 将硅胶膜吸附柱放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 分

钟,倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残

余的专用洗柱液。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的专用洗柱液去

除,否则其中的乙醇残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。

10. 将硅胶膜离心吸附柱转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空

滴加 50-200 μL 专用 DNA 洗脱液,室温放置 2-5 分钟,12,000 rpm

(~13,400×g)离心 1 分钟,将溶液收集到离心管中。注意:专用 DNA

洗脱液的体积不应少于 50 μL,体积过小影响回收效率。为增加基因组

DNA 的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱中,室温放置 2 分钟,

12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 分钟。洗脱液的 pH 值对于洗脱效

率有很大影响。若用超纯水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,

pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA

 

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