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柱式粪便DNA提取试剂盒

柱式粪便DNA提取试剂盒

简要描述:

柱式粪便DNA提取试剂盒


英文名称:Column Stool DNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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柱式粪便DNA提取试剂盒

产品介绍:

柱式法提取粪便总DNA,包括肠道细胞和微生物

柱式粪便DNA提取试剂盒产品及特点 

本产品是动物粪便 DNA提取试剂的柱式升级产品,专门用于从各种

动物粪便中快速提取高质量的 DNA。跟动物粪便 DNAout,它具有下列特点:

1. 操作更加简单快速,一个样品只需要十多分钟的时间。

2. DNA 更加纯净,OD260/280 一般都在 1.8 以上,得到的 DNA 样品原液或稀

释液可以直接用于 PCR 扩增。

3. 每次微量提取可以处理 100-300mg 左右的样品,能得到 5 ug 左右 DNA,片

段长度在 30 Kb 左右。

4. 可以同时提取到肠道上皮细胞和可能的肠道病原菌的 DNA。

5. 试剂无毒无害, 环保。

 

 

运输及保存 常温运输及保存,有效期一年。

自备试剂绿仿。

使用方法 1. 65℃预热溶液 A,待其沉淀溶化后充分混匀,取 0.5 mL 加入到 1.5 mL 塑料

离心管中并放置于 65℃待用。

2. 称取 0.1-0.3 g 的粪便,加入到含预热溶液 A 的离心管中,震荡器上剧烈震荡

5-10 分钟。如果是扩量操作,可以使用更多粪便和较大离心管。也可以将同一

种粪便在较大离心管中震荡处理,然后再分到 1.5 mL 离心管中。注意:不论使

用大的还是小的离心管,一定要让管底的粪便震荡起来。

3. 将离心管置于 65℃水浴中保温至少 5 分钟。

4. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟,将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈

淡黄色或深棕色,实际颜色随样品而异,上清液的体积一般为 300-400 μL)。

5. 在上清液中加入等体积的溶液 B,上下颠倒 30 秒充分混匀,溶液将呈白色或

淡黄色混浊状。

6. 将离心管冰浴至少 5 分钟。

7. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟,转移上清到新的 1.5 mL 离心管中,上清

液颜色将比第 4 步得到的上清的颜色稍淡,体积在 0.7 mL 左右。

注意:下面第 8-第 9 步的绿仿抽提操作可以省略,直接进入第 10 步,但 DNA 的

产量会低 50%左右,OD260/280 在 1.7-1.8。如果直接进入第 10 步,则转移的

溶液体积不要超过 0.6 mL,否则没有空间加溶液 C。

8. 加入 0.2 mL 的绿仿(自备),震荡器上充分振荡 30 秒混匀。注意:一定要让管底

的溶液震荡起来。

9. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟,小心转移上清到新离心管中。说明:离心

后两相交界面将有白色膜状物,其中有机相部分颜色较深,一般呈淡棕色。将

0.5 mL 上清转移到新的 1.5 mL 离心管中。如果有多余的可以弃之不用。

10. 加入 0.8 mL 的溶液 C,上下颠倒 30 秒混匀。

11. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,12000-15000 g 室温

离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中,12000-15000

g 室温离心半分钟,弃穿透液)。

12. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000 g 室温离心半分钟,弃

穿透液。

13. 如果有必要,可以再加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000 g

室温离心半分钟,弃穿透液。增加一步洗涤能使得到的 DNA 的纯度稍有

提高,但产量稍微有所降低。

14. 12000-15000 g 室温再离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液

会污染 DNA。

15. 将离心吸附柱转移到一新的 1.5 mL 塑料离心管中,加入 50-100 uL DNA 洗

脱液 2.0。

16. 室温放置离心吸附柱 1-2 分钟。

17. 12000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 DNA 样品,可以立即使

用或存放于冰箱待用。

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