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动物组织DNA提取试剂盒

动物组织DNA提取试剂盒

简要描述:

动物组织DNA提取试剂盒

英文名称:Column Animal DNAOUT

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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动物组织DNA提取试剂盒

产品介绍:

柱式法提取动物组织和培养细胞的DNA

动物组织DNA提取试剂盒产品及特点 

本产品在动物 DNA提取基础上改良而得的柱式升级产

品,主要用于快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组 DNA。跟动物 DNA提取

相比,它具有下列特点:

1. DNA 更加纯净,大多数 DNA 样品的 OD260/280 值在 1.8-1.9 之间。

2. DNA 产率一般在 200ug/g 左右(跟组织种类密切相关)。

3. 可直接用于 PCR、酶切、杂交等后续反应。

4. 操作更加简单,离心吸附操作代替离心沉淀,整个过程室温操作约 10 分钟,

适合大规模样品处理。

5. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。

6. 性价比高,质量和国外同类产品相当,但价格更便宜。

 

运输及保存 常温运输和保存、有效期一年。

自备试剂 绿仿(也可省略,但产量会降低)

使用方法 注意:溶液 A 容易产生沉淀,溶液 B 十分粘稠,用前均需要在 65℃水浴中加热使

沉淀溶解或粘稠度降低,用前充分摇匀。

1. 根据使用材料的不同进行下列操作:

a) 对贴壁细胞:吸尽培养液,在每 10 平方厘米细胞中加入 0.8 mL 预热的溶液

A,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解,然后把裂解液转移到 1.5 mL 塑料离

心管中。

b) 对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每 1-5×106悬浮细胞中加入 0.8 mL

预热的溶液 A,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到 1.5

mL 塑料离心管中。如果是 fibroblasts 或 carcinoma 细胞,0.8 mL 溶液 A

的细胞使用量不要超过 1×106 个细胞。

c) 对新鲜或冷冻的组织:先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入 10

mL 或 15 mL 塑料离心管中,每 50-100 mg 组织加 0.8 mL 预热的溶液 A,

用剪切式匀浆器匀浆 30 秒左右,然后把裂解液转移到 1.5 mL 塑料离心管中。

对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的 DNA),

建议组织的使用量不要超过 50 mg。

d) 对 DNALOCKER 保存组织:先用纸吸去 DNALOCKER 液体后再剪切成小块,其余

操作同新鲜或冷冻组织的处理。

2. 加入 0.4 mL 预热的溶液 B 到裂解液中。由于溶液 B 十分粘稠,可将 1mL 枪

头剪掉一截再用,也可以用称量方法加 0.4 g。加入溶液 B 后需要颠倒数次充

分混匀。

3. 65℃水浴 5-10 分钟。如果室温放置,DNA 产量将降低 10-20%。

4. 加入 0.2 mL 自备绿仿,振荡器上充分振荡混均 30 秒,此时溶液将呈乳白色。

一定要确保离心管底的液体被震荡起来。

5. 12000-15000 g 室温离心 2 分钟。上清透明,中间层为白膜(蛋白层)。

6. 小心将上清液平均转移到两个新的离心管中,避免触及中间的白膜。

7. 每个管中加入 1.5 倍体积的溶液 C,充分颠倒混匀。

8. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,室温放置 2 分钟,

12000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心

吸附柱中,室温放置 2 分钟,12000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液)。

9. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000 g 室温离心半分钟,

弃穿透液。

10. 加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000 g 室温离心半分钟,

弃穿透液。

11. 12000-15000 g 室温再离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液

会污染 DNA。

12. 室温放置半分钟使残留乙醇挥发。

13. 将离心吸附柱转移到一新的 1.5 mL 塑料离心管中,加入 50-100 uL DNA 洗

脱液 2.0,室温放置离心吸附柱 1-2 分钟。

14. 12000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 DNA 样品,可以立即

使用或存放于冰箱待用。

 

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