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痰液DNA提取试剂盒

痰液DNA提取试剂盒

简要描述:

痰液DNA提取试剂盒


英文名称:

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:

产品时间:2020-03-25

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痰液DNA提取试剂盒

产品介绍:

提取痰液DNA

痰液DNA提取试剂盒产品及特点 

痰液是重要的临床样品,可以用于诊断肺癌,肺结核等各种疾病。但是从痰液中纯

化 DNA 十分棘手,为此本公司开发了本产品,于从痰液或其他上呼吸道分泌样品中

纯化 DNA,用于后续的分子生物学分析。本产品具有下列特点:

1. 每次可以处理 10-20 mL 痰液,得到 2-5 ug DNA。

2. 纯度高,可直接用于后续得 PCR 检测。

3. 一管式操作,减少污染,节约成本。

4. 含痰液保存液(溶液 A),便于取样和运输。

5. 无毒环保,不需要使用苯酚和绿仿等有毒的有机溶液。

 

运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。

自备试剂 异丙醇,70%乙醇。

使用方法 一:痰标本的获取与保存(注意:痰液以及下列操作的废弃液都可能含有致病性的结核

杆菌等致病菌,需按传染源相关规定流程进行操作)

1. 每例患者在常规痰标本采样时,连续三天采集三次样品以防误差。具体做法是

先在每个 50 mL 的痰液收集管内新鲜加入 10 mL 溶液 A 和 10 mL 溶液 B,待患

者晨起漱口后,咳深部痰 7~8 口(约 10-20mL),收集到装有溶液 A 和溶液 B 混

合液的痰液管收集内,混匀后储于 4℃冰箱或阴凉处。第二、三天重复此操作。取

足三管后一起送实验室,4℃冰箱保存直到使用(一般不超过 7 天)。

2. 使用时,在室温反复振摇装有样品(总体积约 30-40 mL)的痰液收集管 5~10 分

钟,充分混匀直到痰液中无粘稠痰块而呈均匀的液相。

3. 4℃2500g 离心 5 分钟,弃上清。

4. 沉淀再用自备的 PBS 液洗两遍。

5. 所得沉淀可以直接用于涂片,用于比较细胞形态学分析。也可以将细胞沉淀在 0.2mL

PBS 缓冲液中重悬后转入 1.5 mL 螺旋盖塑料离心管,-20℃冰箱长期保存,或立

即用于下步的 DNA 提取。为避免盖子崩开而出现交叉污染或痰液的分枝杆菌污染环

境,建议不要使用压盖式塑料离心管。同时设置一个阳性和一个阴性对照。

二:DNA 提取

6. 在上步所得的 0.2 mL 样品中加入 0.6 mL 溶液 C。溶液 C 容易形成沉淀,用前需

37℃加热融化并摇晃均匀。

7. 室温放置 10 分钟。此间可以在每个管外壁上做个标记,以在下步区别向心面和离心

面。

8. 振荡数秒后加入 0.7 mL 自备的异丙醇,旋紧盖后振荡 30 秒混匀。

9. 把离心管的向心面对向转头,13,000-15,000 g 室温离心至少 15 分钟。

10. 小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的 DNA 沉淀(此时可能看不见)。

11. 加入 1.0 mL 70%乙醇, 振荡数秒后 15,000 g 室温离心 5 分钟。注意:在离心机

中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。

12. 小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的 DNA 沉淀(此时呈膜状沉淀)。

13. 将离心管放回离心机再短暂离心数秒, 然后用移液器移弃约 50 uL 残留液体(70%

乙醇),否则它会影响后续反应。

14. 加入 200 μl RNase-free 水,用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状

DNA 沉淀,溶液将呈混浊状,含少量不溶,短暂离心后存上清(含 DNA)。

15. 直接取适量用于 PCR,样品使用量不超过 PCR 体系的 1/2。剩余 DNA 样品可以室

温放置 2 小时,也可保存于-80℃保存一个月。

 

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