TOP10感受态细胞

TOP10感受态细胞  

运输与保存方法：干冰运输

保存温度：-80°保存

操作说明:

1. 取 100μl 冰上融化的TOP10感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上 静置 25 分钟。TOP10感受态细胞  10×100μl pUC19（control vector） 10pg/μl

2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基（2YT 或 LB），混匀后 37℃，200rpm 复苏 60 分 钟。

4. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。

5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1. 感受态细胞在冰上融化。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

 3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-2mM 均可）。

5. 为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG 浓度需实验者优化。 Sample Induction Protocol (for reference only)

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